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中检维康iELisa呕吐毒素检测ELISA试剂盒
概要
呕吐毒素也称为脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),是由串珠镰刀菌、轮状镰刀菌以及多育镰刀菌等产生的真菌毒素,大多存在于粮谷、饲料及其制品中。中毒后影响消化系统和神经系统,主要表现为呕吐、头痛、头晕、腹痛、腹泻等症状。我国标准规定:玉米、大麦、小麦及其制品中呕吐毒素不得超过1mg/kg,猪、犊牛、泌乳期动物配合饲料中呕吐毒素不得超过1mg/kg,牛、家禽配合饲料中呕吐毒素不得超过5mg/kg。
原理
测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有抗抗体。加入呕吐毒素(DON)标准品或样品、酶标抗原和抗体后,游离的呕吐毒素与酶标抗原竞争结合抗体,抗体或抗体结合物与固定在微孔板上的抗抗体再结合,没有结合的标准品、酶标抗原及抗体被洗去,加入TMB底物显蓝色,加入终止液后颜色由蓝变黄,用酶标仪在450nm处检测,吸光值与样品中呕吐毒素含量成负相关,与标准曲线比较即可得出呕吐毒素的含量。
试剂盒的组成
包被有抗抗体的96微孔板:1块(96 孔,12 条×8 孔)
DON标准品:0ng/mL 、10ng/mL、40ng/mL、100ng/mL、250ng/mL 1 瓶 × 1.0mL
DON抗体: 1 瓶 × 10mL
DON酶标抗原: 1 瓶 × 10mL
10× 浓缩洗涤液: 1 瓶 × 50mL
DON稀释缓冲液A: 1 瓶 × 50mL
DON稀释缓冲液B: 1 瓶 × 50mL
显色底物TMB: 1 瓶 × 17mL
终止液: 1 瓶 × 7mL
试剂盒说明书: 1份
质检报告: 1份
需要的仪器、试剂
仪器
酶标仪 450nm(iELisa全自动酶标仪或相当者)
微量移液器:20μL-200μL单道,100μL-1000μL单道, 50μL-300μL八道
多功能旋转混合器(或者摇床、高速均质器)
酶标板振荡器
涡旋混合器
离心机
50mL离心管
1.5mL离心管
定性滤纸
过滤漏斗
天平:感量0.01g
试剂
纯水(蒸馏水、去离子水)
适用样品:谷物(玉米、小麦、大麦、大米、大豆),饲料(高灵敏度),饲料,发酵液,尿液样品。
注意事项
室温低于20℃或试剂及样品未回到室温(20- 25℃)会导致数值偏低。
在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。
标准物质和显色液对光敏感,避免直接暴露在光线下。
混合要均匀,洗板要*(包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀)。
终止液为强酸性物质,避免接触皮肤。
不要使用过了有效期的试剂盒,也不要混合使用不同批次的试剂盒,这样会引起测定结果不准确。
试剂盒的储存条件是2-8℃,切勿冷冻。
中检维康iELisa呕吐毒素检测ELISA试剂盒
性能指标
检测限LOD: 谷物0.15ppm(mg/kg),饲料0.25ppm(mg/kg),发酵液0.15ppm(mg/kg),尿液0.05ppm(mg/kg)。(LOD:空白样品测定值+2倍标准偏差SD)
定量限LOQ: 谷物0.25ppm(mg/kg),饲料0.5ppm(mg/kg),发酵液0.25ppm(mg/kg),尿液0.1ppm(mg/kg)。
定量检测范围:谷物0.25-6.0ppm,饲料0.5-12.0ppm,发酵液0.25-6.0ppm,尿液0.1-1.0ppm。