CLOVER玉米赤霉烯酮酶联免疫检测试剂盒

1. 概要

iELisa玉米赤霉烯酮检测试剂盒利用竞争性酶联免疫反应原理，对玉米、麦类、豆类、大米等谷物和饲料中玉米赤霉烯酮的含量进行定量检测。玉米赤霉烯酮是由镰刀菌类的真菌形成，它是一种植物性激素，并具雌激素性特征。玉米赤霉烯酮具有较强的生殖毒性和致畸作用，可引发动物发生雌性激素亢进症，导致动物不孕或流产，对家畜特别是猪、牛和羊的影响较大。中国标准规定：玉米、小麦中玉米赤霉烯酮不得超过60μg /kg，配合饲料、饲料原料玉米中玉米赤霉烯酮不得超过500μg /kg。

1. 原理

测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有抗抗体。加入玉米赤霉烯酮（ZEN）标准品或样品、酶标抗原和抗体后，游离的玉米赤霉烯酮与酶标抗原竞争结合抗体，抗体或抗体结合物与固定在微孔板上的抗抗体再结合，没有结合的标准品、酶标抗原及抗体被洗去，加入TMB底物显蓝色，加入终止液后颜色由蓝变黄，用酶标仪在450nm处检测，吸光值与样品中玉米赤霉烯酮含量成负相关，与标准曲线比较即可得出玉米赤霉烯酮的含量。

1. 试剂盒的组成

1. 包被有抗抗体的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）

2. 玉米赤酶烯酮标准品：0 ng/mL 、1.0ng/mL、5.0ng/mL、15.0ng/mL、50.0ng/mL；              1 瓶 × 1.0mL

3. ZEN酶标抗原：             1 瓶 ×10mL

4. ZEN抗体：                 1 瓶 × 10mL

5. 10× 浓缩洗涤液：           1 瓶 × 50mL

6. ZEN稀释缓冲液A：          1 瓶 × 50mL

7. ZEN稀释缓冲液B：          1 瓶 × 50mL

8. 10倍浓缩洗涤液             1 瓶 × 50mL

9. 显色底物TMB：             1 瓶 × 17mL

10. 终止液：                   1 瓶 × 7mL

11. 试剂盒说明书：             1份

12. 质检报告：                 1份

1. 需要的仪器、试剂

1）仪器  

1. 酶标仪450nm（iELisa全自动酶标仪或相当者）

2. 微量移液器：20μL-200μL单道，100μL-1000μL单道, 50μL-300μL八道

3. 多功能旋转混合器（或者摇床、高速均质器）

4. 酶标板振荡器

5. 涡旋混合器

6. 50mL离心管

7. 1.5mL离心管

8. 定性滤纸

9. 过滤漏斗

10. 天平：感量0.01g

1. 试剂

1. 样品提取液70%甲醇：取700mL甲醇，加300mL纯水，混匀。

2. 纯水（蒸馏水、去离子水）

CLOVER玉米赤霉烯酮酶联免疫检测试剂盒的性能指标

1. 检测限LOD: 谷物5ppb（μg /kg），饲料50ppb(15ppb),尿液3.0ppb，植物油5ppb（μg /kg）。（LOD：空白样品测定值+2倍标准偏差SD）

2. 定量限LOQ: 谷物10ppb，饲料100ppb(20ppb),尿液5.0ppb，植物油20ppb。

3. 定量检测范围：谷物10-1000ppb，饲料100-5000ppb（20-1200ppb）, 尿液5-250ppb，植物油20-1000ppb。