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分光光度法 50 管/48 样
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
FC 是构成细胞膜的主要成分,也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素 D 等生理活性物质的重要原料。FC 浓度可作为脂代谢的指标。
测定原理:
FC 氧化酶催化 FC 生成△4-胆甾烯酮和 H2O2,过氧化物酶催化 H2O2、4-氨基安替-比林和酚生成红色醌类化合物,在 500nm 有吸收峰,其颜色深浅与 FC 含量成正比。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:异丙醇 50mL(自备);
试剂二:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 50μL×1 瓶,4℃保存;
标准品:液体 1mL×1 支,浓度为 0.5 μ mol/mL,4℃保存。
FC 的提取:
1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内,弃上清,加 1mL 试剂一,超声波破碎 1min(强度 20%,超声 2s,停 1s),即 FC 待测液。
3.血清(浆)样品:直接测定。游离胆固-醇(FC)含量测试盒