脂肪酸合成酶（FAS）

                                                   
                                                          分光光度法10管/9样

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

FAS是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶-A和丙二酰辅酶-A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

测定原理：

FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP⁺；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP⁺没有；通过测定340nm 光吸收下降速率，计算FAS活性。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体10mL×1瓶，－20℃保存。用前取出置于4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入275 μL试剂四，充分溶解。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入275 μL试剂四，充分溶解。

试剂四：液体10 mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入525 μL试剂四，充分溶解。

用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

脂肪酸合成酶（FAS）粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心40min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后12000g，4℃，离心40min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。