丙酮酸脱羧酶（PDC）

分光光度法 50管/48样

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

PDC 主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

测定原理：

PDC 催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和 NAD⁺；NADH 在 340 nm 有吸收峰，而 NAD⁺没有；通过测定 340 nm 光吸收下降速率，来计算PDC 活性。

需自备的仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 36mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1 支，﹣20℃保存。

试剂五：液体 60μL×1 支，﹣20℃保存。

混合试剂：临用前配制，将试剂四和试剂五转移至试剂三中充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂六：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。丙酮酸脱羧酶（PDC）

粗酶液提取：

1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率 200W，工作 3s，间歇 10s，工作 35 次）， 16000g 4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。

2、组织处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，16000g 4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）等液体样品：直接检测。