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人血管紧张素Ⅱ(Angiotensin II, ANG-Ⅱ)ELISA科研试剂盒是一款专门用于检测人类血清、血浆、细胞培养上清等生物样本中血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)水平的工具。ANG-Ⅱ是肾素-血管紧张素系统(RAAS)中的一种关键肽类激素,主要参与血压调节、体液平衡和血管的生理功能调控。本试剂盒通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,具有高灵敏度和高特异性,适合用于科研领域,帮助科研人员定量测定ANG-Ⅱ的含量,并研究其在多种生理病理过程中的作用。
二、血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)背景信息
ANG-Ⅱ是RAAS系统中的一种主要效应因子,通过与血管紧张素Ⅱ受体(AT1和AT2)结合,发挥以下生理和病理功能:
血管收缩:ANG-Ⅱ具有强大的血管收缩作用,增加外周血管阻力,从而提高血压。
水盐平衡调节:ANG-Ⅱ刺激醛固酮分泌,促进肾脏对钠和水的重吸收,调节体液和电解质平衡。
心血管重塑:ANG-Ⅱ参与心血管系统的结构性重塑,过度的ANG-Ⅱ水平与高血压、动脉粥样硬化和心力衰竭等疾病的发生密切相关。
炎症反应:ANG-Ⅱ还可以通过诱导炎症因子的表达,参与炎症反应和纤维化过程。
由于ANG-Ⅱ在多种疾病,如高血压、慢性肾病、心血管疾病和代谢紊乱中的关键作用,检测其浓度对于这些疾病的基础研究和治疗探索具有重要意义。
三、试剂盒原理
人血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒利用酶联免疫吸附试验(ELISA)的双抗体夹心法或竞争法原理,具体操作取决于说明书的详细要求。试剂盒中微孔板已包被有针对ANG-Ⅱ的特异性抗体,样本中的ANG-Ⅱ与之结合形成抗原-抗体复合物。经过洗涤步骤后,加入酶标记的二抗,二抗通过与抗原结合发挥作用,最终通过加入底物显色反应并在酶标仪中读取450 nm的吸光度值。样本中的ANG-Ⅱ浓度通过标准曲线进行定量分析。
四、试剂盒参数
试剂盒名称:人血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA科研试剂盒
检测原理:酶联免疫吸附试验(ELISA)—双抗体夹心法或竞争法
检测靶标:血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)
样本类型:血清、血浆、尿液、细胞培养上清、组织匀浆等生物样本
检测范围:一般为 0.1-1000 pg/mL,具体检测范围以批次说明书为准
灵敏度:通常为 1 pg/mL或更高,视具体试剂盒版本而定
样本用量:50-100 µL,每孔
检测时间:3-5小时,具体根据操作步骤
重复性:板内和板间变异系数(CV%)通常小于10%
检测波长:450 nm(带570nm或630nm校正波长)
标准曲线:根据标准品浓度梯度绘制标准曲线,用于定量分析样本中的ANG-Ⅱ浓度
保存条件:2-8°C保存,避免反复冻融
有效期:6-12个月,具体批次以说明书为准
操作步骤:样品加样、抗原-抗体反应、洗涤、加酶标抗体、显色、终止反应、读数
适用范围:用于科研中的ANG-Ⅱ含量检测,广泛应用于心血管疾病、肾脏病、高血压等疾病研究
五、试剂盒组成
包被微孔板:预包被有针对ANG-Ⅱ的特异性抗体,用于捕获ANG-Ⅱ。
标准品:ANG-Ⅱ标准品,用于绘制标准曲线,定量分析样本中的ANG-Ⅱ。
酶标二抗:特异性结合ANG-Ⅱ的酶标抗体,帮助进行检测。
洗涤液:用于洗涤微孔板,去除未结合的成分,减少背景噪音。
显色液:TMB底物,经过酶反应产生可检测的颜色变化。
终止液:用于终止显色反应,确保结果稳定可测。
样品稀释液:用于稀释生物样本,确保浓度在检测范围内。
说明书:提供详细操作步骤和注意事项。
六、操作步骤
样品与标准品准备:根据说明书对样本和标准品进行适当稀释,准备好各个浓度的标准品。
加样:将标准品和样本加入到包被的微孔板中,每个样本应至少做两次重复。
孵育:在温度条件下孵育,确保抗原与抗体充分结合。
洗板:用洗涤液多次洗板,清除未结合的抗体、抗原等干扰物质。
加酶标二抗:加入酶标二抗后,孵育并再次洗板。
显色反应:加入显色底物,发生酶促反应,生成有色产物。
终止反应:加入终止液,固定颜色变化。
读数:用酶标仪在450 nm波长下读取吸光度值,通过标准曲线计算出样本中的ANG-Ⅱ浓度。
七、试剂盒优势
高灵敏度:试剂盒可检测低至1 pg/mL的ANG-Ⅱ浓度,适用于低丰度样本的检测。
特异性强:使用双抗体夹心法,确保对ANG-Ⅱ的高特异性检测,避免交叉反应。
操作简便:步骤简单,适合各类实验室操作,节省时间。
重复性好:板内和板间的变异系数均小于10%,确保结果的精确性和一致性。
适用范围广:适用于多种样本类型,包括血清、血浆、细胞培养上清等,应用广泛。
八、应用领域
心血管研究:用于检测ANG-Ⅱ在高血压、动脉粥样硬化等心血管疾病中的作用。
肾脏病研究:评估ANG-Ⅱ在肾功能失调中的表现,如慢性肾病和肾小球疾病。
内分泌学研究:研究ANG-Ⅱ在体液平衡和血压调节中的重要作用。
炎症与纤维化:ANG-Ⅱ在炎症反应和组织纤维化中的作用研究,为治疗相关疾病提供依据。
药物筛选:用于检测药物对ANG-Ⅱ水平的影响,特别是在抗高血压药物的研究中。
九、注意事项
试剂盒在操作前应仔细阅读说明书,严格按照步骤进行操作。
样本在使用前应避免反复冻融,确保样本质量稳定。
在实验过程中,需防止样本交叉污染,尤其在加样和洗板过程中要特别注意。
试剂盒仅供科研使用,不得用于临床诊断。
实验中不同批次试剂盒的标准品不可混用,以确保结果准确性。
十、总结
人血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA科研试剂盒是一种高效、可靠的检测工具,适用于研究血压调节、体液平衡及与血管功能相关的各种生理病理过程。该试剂盒操作简便,灵敏度高,能够广泛应用于心血管、肾脏病、高血压等领域的基础研究中。通过定量检测ANG-Ⅱ水平,科研人员能够深入了解其在疾病中的作用,进而为相关疾病的治疗提供新的思路和策略。