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BB-47449 天门冬氨酸氨基转移酶（AST）检测试剂盒
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- BB-47449
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详细信息
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒 BB-47449
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒
使用方法：
1、 准备样品：
① 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，
-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。
② 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个
月有效，用于AST/GOT的检测。
③ (选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续
计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT含量。
2、 制作AST标准曲线：
加入物 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 |
丙酮酸标准(2mmol/L)(μl) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 |
标准对照液(μl) | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
AST assay buffer(μl)(37℃提前孵育5min) | 20 | 18 | 16 | 14 | 12 |
相当于ALT/GPT(卡门单位) | 0 | 24 | 61 | 114 | 190 |
混匀，向各管中加入二硝基苯肼显色液，混匀孵育后，加入AST显色基液200μl，混匀。室温放置，分光光度计505nm处，以蒸馏水调零，读取各管吸光度。各管吸光度均减去”0”号管吸光度，所得吸光度差值(纵坐标)与对应的卡门酶活力单位(横坐标)作图。
3、 AST酶促反应：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免
产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
加入物 | 对照管 | 测定管 |
待测样品(如血清等)(μl) | 4 | 4 |
AST assay buffer(μl) | 20 | − |
混匀，37℃水浴孵育30min。 | ||
AST assay buffer(μl)(提前孵育) | − | 20 |
二硝基苯肼显色液(μl) | 20 | 20 |
混匀，37℃水浴孵育20min。 | ||
AST显色基液(μl) | 200 | 200 |
4、 AST检测：混匀，室温放置5min。酶标仪505nm处检测吸光度，以蒸馏水调零，读
取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。
5、计算：
以标准管活力单位为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
测定管吸光度减去对照管吸光度后，从标准曲线查得AST活力单位。
参考范围：
成年健康人血清AST：8-28卡门单位/ml
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒
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