β-淀粉*（
β-AL）活性检测试剂盒说明书（DNS显色法）
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2045
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；

2. 试剂二：临用前取取1支试剂三加入到1瓶试剂二中，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂2-8℃保存4周；

3. 标准品：10 mg无水*萄糖。临用前加入1 mL蒸馏水配制成10 mg/mL的标准溶液，2-8℃保存两周。

产品说明：
淀粉*负责水解淀粉，主要包括α-淀粉*和β-淀粉*。β-淀粉*(EC 3.2.1.2) 从淀粉的非还原端切开α-1,4糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉*不耐酸，β-淀粉*不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉*的活力。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约0.1g样本，加入0.8mL蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取15min，每5min振荡1次，使其充分提取；6000g，常温离心10min，取上清液加蒸馏水定容至10mL，摇匀，即淀粉*原液。
吸取上述淀粉*原液1mL，加入4mL蒸馏水，摇匀，即为淀粉*稀释液，用于（α+β）淀粉*总活力的测定。
二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到540nm，分光光度计蒸馏水调零。

1. 标准液的稀释：将10mg/mL葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078 mg/mL的标准溶液。

2. 标准液稀释可参考下表：

备注：实验中每个标准管需75µL标准溶液。

1. 取2支EP管分别加入75μL淀粉*原液和淀粉*稀释液，沸水浴5min，分别作为α-淀粉*对照管和总淀粉*对照管使用。

2. 测定操作表：

混匀，沸水浴10min，取200μL至96孔板或微量玻璃比色皿中，在540nm下测定吸光度，从左到右分别记为A1、A2、A3、A4、A5和A6，计算ΔAα=A2-A1，ΔA总=A4-A3，ΔA标准=A5-A6。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2次。

注意事项：
测定的吸光值大于1.5时，可以对样本进行适当稀释后测定。若吸光值过小，可以浓缩淀粉*稀释液或者淀粉*原液。
参考文献：
[1] Dziedzoave N T, Graffham A J, Westby A, et al. Influence of variety and growth environment on β-amylase activity of flour from sweet potato (Ipomea batatas)[J]. Food control, 2010, 21(2): 162-165.
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