甘油三酯（TG）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0620
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：自备玻璃空瓶，*和异丙醇按体积比1:1混合，盖紧后混匀，大约需要90mL，现用现配，2-8℃保存；

2. 标准品：临用前加5 mL试剂一，即1mg/mL甘油三酯标准溶液，-20℃分装保存两周,避免反复冻融。

技术指标：
检出限：0.0559 mg/mL
线性范围：0.0625-1.2 mg/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、涡旋振荡仪、*、异丙醇、蒸馏水和100mL玻璃空瓶。
操作步骤：

• 样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清待测。

2. 细胞、细菌：先收集500-1000万细胞或细菌到离心管内，离心弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎1min（功率200W，超声2s，停1s），8000g，4℃离心10min，取上清待测。

3. 血清（浆）等液体样本：直接测定。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min，调节波长到420nm，蒸馏水调零。

2. 水浴锅预热到65℃。

加试剂一后充分混匀，再加试剂二，剧烈振荡30s，静置3-5min后再剧烈震荡30s，如此反复3次，常温静置一定时间分层后取上层溶液75μL，置于新的EP管中。
3．甘油三酯含量测定：

取出EP管，待冷却后，吸取全部反应液至玻璃比色皿中，于420nm 处比色，记为A空，A标和A测。（空白管和标准管只需检测1-2次。）
三、TG计算公式：
1. 血清（浆）中甘油三酯含量：
TG含量（mg/dL）=C标准品×（A测-A空）÷（A标-A空）×100 =100×（A测-A空）÷（A标-A空）  
2. 组织或细胞、细菌中甘油三酯含量：
(1) 按样本蛋白浓度计算
TG含量（mg/mg prot）= C标准品×V×（A测-A空）÷（A标-A空）÷（Cpr ×V）
=（A测-A空）÷（A标-A空）÷ Cpr
(2) 按样本质量计算
TG含量（mg/g质量）= C标准品×V×（A测-A空）÷（A标-A空）÷W=（A测-A空）÷（A标-A空）÷ W
(3) 按细胞/细菌数量计算：

TG含量（mg/10⁴ cell）= C标准品×（A测-A空）÷（A标-A空）×V÷N
=（A测-A空）÷（A标-A空）÷N
C标准品：标准品浓度，1mg/mL；100：单位换算系数，1dL=100mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V：加入试剂一的体积，1mL；N：细菌或细胞数量，以万计。
注意事项：

1. 试剂盒中有易挥发性物质，实验过程中需佩戴手套和口罩，试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。

2. 加试剂二后需反复剧烈振荡，使待测液中甘油三酯得到充分提取，振荡幅度、时间、反复次数以及等待分层时间均应保证一致。

3. 为保证试验的重复性，每次水浴后的冷却时间要统一。

4. 若测定管OD值大于1时，建议将样本用试剂一适当稀释后再进行检测，并在计算时需乘以相应的稀释倍数。

相关发表文献：

1. Wei Hu,Rui Wei,Liyue Wang,et al. Correlations of MMP-1, MMP-3,and MMP-12 with the degree of atherosclerosis, plaque stability and cardiovascular and cerebrovascular events. Experimental and Therapeutic Medicine. 2018;(IF1.448)

2. Jieyong Xing,Yanshao Liu,Tao Chen. Correlations of chemokine CXCL16 and TNF-α with coronary atherosclerotic heart disease. Experimental and Therapeutic Medicine. November 2017;(IF1.448)

3. Zhenbin Xu,Xizhuang Bai. Strontium ranelate-induced anti-adipocytic effects are involved in negative regulation of autophagy in rat bone marrow mesenchymal stem cells. International Orthopaedics. October 2018;(IF2.384)

4. Chu X Y, Yang S Z, Zhu M Q, et al. Isorhapontigenin Improves Diabetes in Mice via Regulating the Activity and Stability of PPARγ in Adipocytes[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2020, 68(13): 3976-3985.

5. Li W, Li Y, Zhao Y, et al. The protective effects of aloperine against ox-LDL-induced endothelial dysfunction and inflammation in HUVECs[J]. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology, 2020, 48(1): 107-115.

参考文献：

1. Fletcher M J. A colorimetric method for estimating serum triglycerides[J]. Clinica Chimica Acta, 1968, 22(3): 393-397.

2. Hercules D M, Sheehan T L. Chemiluminescent determination of serum glycerol and triglycerides[J]. Analytical chemistry, 1978, 50(1): 22-25.

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