糖原磷酸化酶b（GPb）活性检测试剂盒说明书
                                            微量法
货号：BC3355
规格：100T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入0.5 mL蒸馏水，充分混匀；

2. 试剂三：临用前加入0.5mL蒸馏水，充分混匀；可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融；

3. 试剂四：临用前加入1.25 mL蒸馏水，充分混匀；可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融；

4. 试剂五：临用前每支加入1 mL蒸馏水，充分混匀；可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融；一支即可做100T，为延长试剂盒使用时间故多给一支。

5. 试剂六：临用前每支加入1 mL蒸馏水，充分混匀；可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融；一支即可做100T，为延长试剂盒使用时间故多给一支。

6. 试剂七：临用前加入2 mL蒸馏水，充分混匀；可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融；

7. 工作液的配制：临用前根据实验所需用量，按照试剂一：试剂二：试剂三：试剂四 =148μL: 4μL: 4μL: 4μL（1T的量）的比例，充分混匀，现用现配。

产品说明：
糖原磷酸化酶是糖原分解代谢中的关键酶，催化糖原的磷酸化反应。该酶分为有活性的糖原磷酸化酶a（Glycogen phosphorylase a, GPa）和无活性的糖原磷酸化酶b（Glycogen phosphorylase b, GPb）两种形式。糖原的分解主要在糖原磷酸化酶a的催化下进行。未添加激活剂时，糖原磷酸化酶a催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH，在340nm下测定NADPH上升速率，即可反映糖原磷酸化酶a活性。添加激活剂测定GP（GPa和GPb）总活性，未添加激活剂时测定GPa活性，GP活性-GPa活性得到GPb活性。在340nm下测定NADPH上升速率，即可反映糖原磷酸化酶a活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、研钵/匀浆器、电子天平、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件

注意事项：

1. 如果测定吸光值ΔA＞0.6，建议稀释样本后再测定，计算公式中乘以稀释倍数；如果测定吸光值较低或接近空白OD值，建议增加样本量后再进行测定。

实验实例：

1. 称取0.1 g兔子肝脏组织，加入1 mL提取液，冰浴匀浆，8000 g，4℃条件下离心10 min；取上清置于冰上待测。用石英比色皿按照测定步骤操作，计算ΔA_GPa=A2-A1=0.3472-0.2253=0.1219，ΔA_GP=A4-A3=0.4059-0.2274=0.1785,按公式计算活性：GPb（U/g 质量）=321.54×(ΔA_GP-ΔA_GPa)÷W =321.54×(0.1785-0.1219)÷0.1 =181.99U/g 质量

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