总糖含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

货号：BC2710

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1．标准品：10 mg无水*萄糖。临用前加1 mL蒸馏水溶解为10 mg/mL的葡萄糖标准品备用，2-8℃保存两周。

产品说明：

糖类物质是构成植物体的重要成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖，麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。

总糖酸水解为还原糖，还原糖在碱性条件下与DNS试剂共热后被还原成氨基化合物，在碱性溶液中呈红棕色，还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系，以此测定样本中的总糖含量。

技术指标：

低检出限：0.0444 mg/mL

线性范围：0.1-1 mg/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织样本的处理：称取约0.1g样本于10mLEP管中，加入1mL 试剂一，1.5mL蒸馏水，研磨匀浆，沸水浴30min，加入1mL试剂二，涡旋混匀，用蒸馏水定容至10mL，8000g，25℃离心10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）。

2、血清（浆）、液体样本的处理：取0.1mL血清（浆）于1mLEP管中，加入0.1mL 试剂一，0.15mL蒸馏水，匀浆，沸水浴30min，加入0.1mL试剂二，涡旋混匀，用蒸馏水定容至1mL，8000g，25℃离心10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）。

二、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.5、0.2、0.1mg/mL，标准液稀释可参考下表：

备注：实验中每个标准管需150µL标准溶液。

3、加样表：

涡旋混匀，在540nm下测定吸光值，分别记为A空白管、A测定管、A标准管。计算ΔA测定=A测定管-A空白管、ΔA标准=A标准管-A空白管。标准曲线和空白管只需测1-2次。

三、总糖含量计算

1、标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。

2、按样本质量计算：总糖含量（mg/g 质量）=（x×V样总）÷W×稀释倍数=10×x÷W×稀释倍数

3、按血清（浆）、液体体积计算：总糖含量（mg/mL）=（x×V提）÷V样×稀释倍数=10×x×稀释倍数

V样总：样本体积总体积，10mL；W：样本质量，g；V提：液体或血清样本总体积，1mL；V样：液体或血清体积，0.1mL。

注意事项：

1、此试剂盒对于纤维素的分解程度无法达到100%。

2、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。

实验实例：

1、 取0.1g兔子肝脏进行样本处理，取上清，按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.965-0.019=0.946，标准曲线y=1.2984x-0.0284，则x=0.7505，按样本质量计算含量得：

总糖含量（mg/g 质量）=10×x÷W=75.05 mg/g 质量。

2、 取0.1g迎春进行样本处理，取上清，按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.961-0.019=0.942，标准曲线y=1.2984x-0.0284，则x=0.7474，按样本质量计算含量得：

总糖含量（mg/g 质量）=10×x÷W=74.74 mg/g 质量。

3、 取小鼠血清进行处理，取上清，按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.459-0.019=0.440，标准曲线y=1.2984x-0.0284，则x=0.3608，按血清体积计算含量得：

总糖含量（mg/mL）=10×x=3.608 mg/mL。

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