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6-磷酸葡萄糖酸
脱氢酶(6PGDH)活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
货号: BC2100
规格: 50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
试剂二:临用前配制,加入5 mL试剂一,混匀;
试剂三:临用前配制,加入5 mL试剂一,混匀。
产品说明:
磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)依次催化NADPH合成,与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外,6PGDH逆境生理中具有重要作用。
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH,NADPH在340nm有特征吸收峰,而NADP+没有;通过测定340nm吸光度增加速率,计算6PGDH活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项:
样本处理等过程均需要在冰上进行,且须在提取当日完成酶活性测定,粗酶液避免反复冻融;
试剂二和试剂三须现配现用,当天未用完试剂保存在4℃,可保存1周。
若样本初始(0s)读值大于0.5且ΔA测定小于0.1,可尝试将样本进行稀释后测定。
实验实例:
称约0.1g肾脏组织,加入1mL试剂一,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心10min,取上清稀释10倍,测得计算ΔA测定=A2测定-A1测定=0.256-0.154=0.102,ΔA空白=A2空白-A1空白=0,按样本质量计算酶活得:
6PGDH酶活性(U/g 质量) =536×(ΔA测定-ΔA空白)÷W×10(稀释倍数)=5467.2 U/g 质量。
相关发表文献:
Wu S, Wang H, Li Y, et al. Transcription factor YY1 promotes cell proliferation by directly activating the pentose phosphate pathway[J]. Cancer research, 2018, 78(16): 4549-4562.
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