苯BING氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

货号：BC0210

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取1瓶加入4 mL蒸馏水充分溶解待用；现配现用。2-8℃可以保存2周。

产品简介：

PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。PAL催化L-苯BING氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。

2、操作表

混匀，静置10min后，在290nm处记录测定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。（空白管只需做1-2次）

三、PAL活性计算

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活力单位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反总÷0.1÷（Cpr×V样）÷T =17.3×ΔA ÷Cpr

（2）按样本质量计算：

单位的定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活力单位。

PAL（U/g 质量）=ΔA×V反总÷0.1÷（V样÷V提取×W）÷T =17.3×ΔA ÷W

V样：加入样本体积，20µL=0.02mL；V反总：反应总体积，1.040mL；V提取：加入提取液的体积，1mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

相关发表文献：

[1] Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus) [J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.

[2] Zhang J, Lv J, Xie J, et al. Nitrogen Source Affects the Composition of Metabolites in Pepper (Capsicum annuum L.) and Regulates the Synthesis of Capsaicinoids through the GOGAT–GS Pathway[J]. Foods, 2020, 9(2): 150.

参考文献：

[1] Aydaş S B, Ozturk S, Aslım B. Phenylalanine ammonia lyase (PAL) enzyme activity and antioxidant properties of some cyanobacteria isolates[J]. Food chemistry, 2013, 136(1): 164-169.

[2] Rosler J, Krekel F, Amrhein N, et al. Maize phenylalanine ammonia-lyase has tyrosine ammonia-lyase activity[J]. Plant physiology, 1997, 113(1): 175-179.

[3] Cheng G W, Breen P J. Activity of phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and concentrations of anthocyanins and phenolics in developing strawberry fruit[J]. Journal of the American Society for Horticultural Science, 1991, 116(5): 865-869.

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