琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒 三羧循环  琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒 三羧循环

琥珀酸脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0950
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存；

产品说明：
SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原*（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表SDH酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件

注意事项：

1. 测定过程中所有试剂和样本在冰上放置，以免变性失活。

2. 若ΔA大于0.5，需将酶液用酶提取液稀释，使ΔA小于0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以稀释倍数。

3. 由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

实验实例：

1. 取0.1g肾脏加入1mL试剂一和10uL试剂二，用冰浴匀浆器匀浆充分研磨，4 ℃ 11000g离心10min，取上清置冰上。按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A1测定-A2测定=0.82-0.681=0.139，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.905-0.904=0.001，按样本质量计算酶活得：

SDH活性（U/g 质量）=1571.111×（ΔA测定-ΔA空白）÷W=2168.13 U/g 质量。
参考文献：

1. Fattoretti P, Bertoni-Freddari C, Caselli U, et al. Impaired succinic dehydrogenase activity of rat Purkinje cell mitochondria during aging[J]. Mechanisms of ageing and development, 1998, 101(1-2): 175-182.

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