柠檬酸（CA）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2150
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂三：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存；

2. 试剂四：临用前取1瓶加入3 mL试剂一，充分溶解，用不完的试剂2-8℃保存一周。

3. 标准品：2 μmol/mL柠檬酸标准液。

产品说明：
CA是生物体内常见的有机酸，是重要的食品风味物质。此外，CA是三羧酸循环第一步反应的产物。
酸性条件下，柠檬酸还原Cr⁶⁺生成Cr³⁺，在545nm处有特征吸收峰；通过测定545nm吸光值的增加，即可计算出样本中柠檬酸含量。

技术指标：
低检出限：0.02 μmol/mL
线性范围：0.032-4 μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：
1、样本处理等过程均需要在冰上进行。
2、试剂五为易致癌物质，实验过程中，需佩戴手套，避免试剂五溅到皮肤上。
3、柠檬酸试剂一不能用于蛋白含量测定，如需测定蛋白含量，需另取组织进行测定。
4、若反应30min后有明显的黑色小颗粒，属于正常现象，需将样本稀释后再测。
5、如果样本吸光值大于0.5，建议将样本用试剂一稀释后进行测定。
实验实例：

1. 取0.1065g 竹子叶片加入1mL试剂一，冰上充分研磨，11000g，4℃离心10min，取上清液按照测定步骤操作，测并计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.281-0.130=0.151，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.438-0.130=0.308，

按样本质量计算得：
柠檬酸含量（μmol/g 质量）=2×ΔA测定÷ΔA标准÷W =9.21 μmol/g 质量。

1. 取0.1094g兔肾脏组织加入1mL试剂一，冰上充分研磨，11000g，4℃离心10min，取上清液按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.440-0.130=0.310，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.438-0.130=0.308，按样本质量计算得：

柠檬酸含量（μmol/g 质量）=2×ΔA测定÷ΔA标准÷W =18.40 μmol/g 质量。

1. 取0.1mL兔血清加试剂一0.9mL，充分混匀，11000g，4℃离心10min，取上清液按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.271-0.130=0.141，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.438-0.130=0.308，按液体样本的体积计算：

柠檬酸含量（μmol/mL）=20×ΔA测定÷ΔA标准=9.156 μmol/mL。
相关发表文献：

1. Meixi Peng,Dan Yang,Yixuan Hou,et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease.March 2019;(IF5.959)

2. Luo M,Luo Y, Mao N,et al. Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication. Cellular Physiology and Biochemistry. November 2018;

3. Zhou Z, Duan Y, Zhou M. Carbendazim‐resistance associated β2‐tubulin substitutions increase deoxynivalenol biosynthesis by reducing the interaction between β2‐tubulin and IDH3 in Fusarium graminearum[J]. Environmental microbiology, 2019.

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