游离*固醇（FC）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1890
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 提取液：自备异丙醇，大约需要60mL，常温保存；试剂盒内提供一个30mL棕色空瓶，仅做分装使用，请自行标注试剂名称。

2. 标准品：10 mg*固醇，临用前加入517 μL提取液，振荡溶解，即为50 μmol/mL的*固醇标准品，2-8℃可保存4周。

3. 工作液的配制：根据样本量将试剂一：试剂二按9mL：60μL（约10T）的比例配制工作液，现用现配。

产品说明：
FC是构成细胞膜的主要成分，也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。测定原理：FC氧化酶催化FC生成4-胆甾烯酮和H₂O₂，过氧化物酶催化H₂O₂、4-氨基安*比林和酚生成红色醌类化合物，在500nm有吸收峰，其颜色深浅与FC含量成正比。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、天平、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、可调式移液枪、EP管、冰、蒸馏水、异丙醇（AR，98%）。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者用提取液稀释样本（血清（浆）用蒸馏水稀释）后再进行测定。注意同步修改计算公式。

2. 提取液中含有使蛋白变性的成分，故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。

实验实例：

1. 取0.1054g大鼠肾脏加入1mL提取液进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，使用1mL玻璃比色皿测得ΔA测定=A测定-A空白=0.592-0.053=0.539，根据标准曲线y=0.7703x-0.0021，R²=0.9989，计算x=0.702，按样本质量计算含量得：

FC含量（μmol/g 质量）=x÷W ×F =6.66 μmol/g 质量。

1. 取5×10⁶个BNL细胞加入1mL提取液进行超声破碎，按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得ΔA测定=A测定-A空白=0.138-0.053=0.085，根据标准曲线y=0.7703x-0.0021，R²=0.9989，计算x=0.113，按细胞数量计算含量得：

FC含量（μmol/10⁶ cell）= x÷N×F =0.0226 μmol/10⁶ cell。

1. 取人血清样本，直接按照测定步骤操作，使用1mL玻璃比色皿测得ΔA测定=A测定-A空白=0.337-0.041=0.296，根据标准曲线y=0.7703x-0.0021，计算x=0.387，R²=0.9989，按血清（浆）等液体体积计算含量得：

FC含量（μmol/dL）=x×100×F =38.7 μmol/dL。
相关发表文献：

1. Qin Yuan,Shang Lin,Yuan Fu,et al. Effects of extraction methods on the physicochemical characteristics and biological activities of polysaccharides from okra (Abelmoschus esculentus). International Journal of Biological Macromolecules. April 2019;127:178-186.

2. Huan Guo,Shang Lin,MinLua Jia,et al. Characterization, in vitro binding properties, and inhibitory activity on pancreatic lipase of β-glucans from different Qingke (Tibetan hulless barley) cul tivars. International Journal of Biological Macromolecules. December 2018;

3. Yao L, Chen S, Li W. Fatostatin inhibits the development of endometrial carcinoma in endometrial carcinoma cells and a xenograft model by targeting lipid metabolism[J]. Archives of Biochemistry and Biophysics, 2020: 108327.

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