总*固醇(TC)含量检测试剂盒 脂肪酸

总*固醇（TC）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1980
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 提取液：自备异丙醇，大约需要60mL，常温保存；试剂盒内提供一个30mL棕色空瓶，仅做分装使用，请自行标注试剂名称。

2. 标准品：10 mg胆*醇，临用前加入517 μL提取液，振荡溶解，即为50 μmol/mL的胆*醇标准品，2-8℃可保存4周。

3. 试剂三：液体置于试剂瓶内EP管中，使用前用掌上离心机将液体甩离至底部。

4. 工作液的配制：根据样本量将试剂一：试剂二：试剂三按9mL：60μL：9μL（约10T）的比例配制工作液，现用现配。

产品说明：
总*固醇（Total Cholesterol，TC）是指所有脂蛋白所含胆*醇的总和，包括游离胆*醇和胆*醇酯。
利用酯酶催化胆*醇酯水解生成游离胆*醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆*醇酯转化为FC；进一步利用胆*醇氧化酶催化FC氧化，生成4-胆甾烯酮和H₂O₂；最后利用过氧化物酶催化 H₂O₂氧化4-氨基安*比林和酚，生成红色醌类化合物，其在500nm有特征吸收峰，其颜色深浅与TC含量成正比。

技术指标：
低检出限：0.01 μmol/mL
线性范围：0.019-1.25 μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、天平、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、可调式移液枪、EP管、冰、蒸馏水、异丙醇（AR，98%）。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者用提取液稀释样本（血清（浆）用蒸馏水稀释）后再进行测定。注意同步修改计算公式。

2. 提取液中含有使蛋白变性的成分，故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。

实验实例：

1. 取0.1054g大鼠肾脏加入1mL提取液进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，使用1mL玻璃比色皿测得ΔA测定=A测定-A空白=0.595-0.053=0.542，根据标准曲线y=0.7703x-0.0021，R²=0.9985，计算x=0.706，按样本质量计算含量得：

TC含量（μmol/g 质量）=x÷W×F =6.698 μmol/g 质量。

1. 取5×10⁶个BNL细胞加入1mL提取液进行超声破碎，按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得ΔA测定=A测定-A空白=0.141-0.053=0.088，根据标准曲线y=0.7703x-0.0021，R²=0.9985，计算x=0.117，按细胞数量计算含量得：

TC含量（μmol/10⁶ cell）= x÷N×F =0.0234 μmol/10⁶ cell。

1. 取人血清样本，直接按照测定步骤操作，使用1mL玻璃比色皿测得ΔA测定=A测定-A空白=0.404-0.041=0.363，根据标准曲线y=0.7703x-0.0021，R²=0.9985，计算x=0.474，按血清（浆）等液体体积计算含量得：

TC含量（μmol/dL）=x×100×F =47.4 μmol/dL
相关发表文献：

1. Qin Yuan,Shang Lin,Yuan Fu,et al. Effects of extraction methods on the physicochemical characteristics and biological activities of polysaccharides from okra (Abelmoschus esculentus). International Journal of Biological Macromolecules. April 2019; 127:178-186. (IF4.784)

2. Wei Hu, Rui Wei, LiYue Wang,et al. Correlations of MMP-1, MMP-3, and MMP-12 with the degree of atherosclerosis, plaque stability and cardiovascular and cerebrovascular events. EXPERIMENTAL AND THERAPEUTIC MEDICINE. 2018;(IF1.448)

3. Jieyong Xing,Yanshao Liu,Tao Chen,et al. Correlations of chemokine CXCL16 and TNF-α with coronary atherosclerotic heart disease. Experimental and Therapeutic Medicine. November 2017;(IF1.448)

4. Jiabin Huang,Shangjun Chen,Dongliang,et al. Long noncoding RNA lncARSR promotes hepatic cholesterol biosynthesis via modulating Akt/SREBP-2/HMGCR pathway. Life Sciences. June 2018;(IF3.448)

5. Li W, Li Y, Zhao Y, et al. The protective effects of aloperine against ox-LDL-induced endothelial dysfunction and inflammation in HUVECs[J]. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology, 2020, 48(1): 107-115.

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