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试剂的组成和配制：
酸性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；碱性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体10 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体3 mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，-20 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂四：粉剂×1瓶，4 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂五：液体3.6mL×1瓶，4 ℃保存；试剂六：液体30mL×1瓶，4 ℃保存；试剂七：液体50mL×1瓶，4 ℃保存。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
商品介绍：
测定意义HK（EC 2.7.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是葡萄糖分解过程中的第一个关键酶，催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。测定原理HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰。需自备的仪器和用品紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 |
商品属性：
产品名称 | |
检测方法 | 紫外分光光度法 |
产品规格 | 50管/48样 |
产品货号 | AS6321159 |
NAD+和NADH的提取：
1、血清（浆）中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取：按照血清（浆）体积（ml）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建 议取约0.1ml血清（浆），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）； 冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中 和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：按照血清（浆）体积（ml）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建 议取约0.1ml血清（浆），加入1ml碱性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）； 冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中 和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 | 2、组织中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g 组织，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴 中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g 组织，加入1ml碱性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴 中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和， 混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 | 3、细胞或细菌中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：酸性 提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml酸性提取液）， 超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min （盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加 入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 NADH的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：碱 性提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml碱性提取液）， 超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min （盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加 入500μl酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 |
ADH测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂二和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。
注意：空白管只需测定一次。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
葛根-6''-O-木糖苷英文名： Basic Fuchsin促卵泡激抗体包装1g
葛根芹菜糖苷英文名： Bromothymol blue神经元核抗原抗体包装5g
蛤蚧（标准品）英文名： Bismuthiol IIFAM135B蛋白抗体包装1g
油（标准品）英文名： Bismuthiol II“衰老关键蛋白”抗体包装5g
隔山消（标准品）英文名： Beryllon II促卵泡激受体抗体包装25g
根皮苷（标准品）英文名： Bromopyrogallol red成纤维生长因子12抗体包装5g
根皮(标准品)英文名： Basic Fuchsin成纤维生长因子14抗体包装100ml
功劳木（标准品）英文名： Brilliant Yellow脑型脂肪结合蛋白抗体包装25ml
钩藤(钩藤)（标准品）英文名： Congo redFAM96B蛋白抗体包装5ml
钩藤碱(标准品)英文名： Calconcarboxylic acid脑胚胎锌指样蛋白1抗体包装1g
钩吻（标准品）英文名： Calconcarboxylic acidFAM29蛋白抗体包装25g
钩吻子（标准品）英文名： Chlorophenol redMaFF相关蛋白抗体包装5g
狗脊（标准品）英文名： Calmagite7抗体包装100g
枸杞子（标准品）英文名： CadionFEM1B抗体包装25g
枸橼血根碱英文名： Cupferron纤维母生长因子3抗体包装5g
黑曲霉Aspergillus│niger var. niger Tiegh. 质量规格：HPLC>98%,标准品状瘤病抗体试剂盒千金藤;Cepharanthine
螺卷毛壳Chaetomium│cochliodes 质量规格：>98.5%,BR状瘤病抗体试剂盒秦皮乙;Esculetin
乳乳球菌乳亚种Lactococcus│lactis subsp. lactis 质量规格：HPLC>98%,标准品状瘤病18型衣壳蛋白L1试剂盒秦皮;Fraxetin
己糖激酶（HK）测试盒50管/48样玉蜀黍平脐蠕孢* Tolcapone类粘蛋白1Elisa
缺陷短波单胞 RKI-1447SPARC相关模块化钙结合蛋白1Elisa
微黄色芽孢杆 Safinamide梅迪-维斯纳病Elisa
尖孢镰孢 Brain Natriuretic Peptide-32 rat铁结合蛋白Elisa
鸡伤寒沙门氏 MG-132去酰氨基麦溶蛋白抗体Elisa
腐皮镰刀(都只确定镰刀属) KPT-185N钙粘着蛋白;上皮性钙黏附蛋白Elisa
叶居 GF109203X色氧化2C9Elisa
酿酒酵母 Blonanserin色P4503AElisa
酿酒酵母 Rocilinostat (ACY-1215)蛋白酪磷酸KElisa
冷纤维单胞 β-淀粉状蛋白25-35角蛋白78Elisa
根瘤 Amyloid β Protein Fragment 1-40Toll样受体3Elisa
盘长孢状盘孢 H 89 2HCl牙龈蛋白KElisa
三叶草根瘤 Entacapone色P450氧化还原Elisa
酿酒酵母 盐酸多佐β葡聚糖Elisa
桦剥管 Y-27632 dihydrochloride硫酸软骨846Elisa
