Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
Protein A/G Agarose Beads 蛋白A/G琼脂糖珠
面议Bovine Serum Albumin(BSA), DNase, Protease, IgG Fr
面议Timentin(特美//汀)
面议Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red 胰酶-EDTA溶液(0.25%),
面议Peroxidase-Conjugated Goat Anti-Mouse IgM , µ
面议Bovine Serum Albumin(BSA), Fatty Acid Free 牛
面议GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂
面议琼脂糖树脂(GST标签蛋白纯化)
¥698His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂
面议独脚金内酯
¥593GAPDH (Clone:1A6), Mouse mAb 小鼠抗GAPDH 单克隆抗体
面议Calcein-AM/PI Double Stain Kit
面议产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接 PCR 试剂盒 | 10184ES50 | 50T | 433.00 |
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接 PCR 试剂盒 | 10184ES70 | 200T | 1453.00 |
产品描述
动物组织直接 PCR 试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行 PCR 扩增的试剂盒,适应性广、稳定性强、操作简易。
本试剂盒采用*的裂解缓冲液体系,可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组 DNA,如昆虫足翅、鼠尾、 鼠趾、动物皮肤和内脏等。裂解产物可以用于 DNA 提取纯化、也可以直接用于 PCR 反应、也可以在 -20℃ 或以下温度条件下长期保存备用。
本试剂盒中提供的 2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很强的扩增兼容性,不需要额外采用纯化提取试剂去除裂解产物中的各种残骸杂质,能直接以待测样品裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂为 2 倍浓缩 PCR 反应混合液,包含了用于 PCR 扩增除模板和引物外的所有组分,大大简化扩增步骤的操作过程,降低污染机率。
该试剂盒可用于动物基因扩增检测、转基因动物基因型鉴定等。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 | 储存 | |
10184ES50(50 T) | 10184ES70(200 T) | |||
10184-A | Lysis Buffer | 10 mL | 20 mL × 2 | 2-8℃ |
10184-B | Proteases | 100 μL | 400 μL | -20℃ |
10184-C 10184-D | 2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 5 × PCR Enhancer | 500 μL 200 μL | 1 mL×2 800 μL | -20℃ -20℃ |
a)Lysis Buffer 和 Proteases 两种组分配合使用于动物组织裂解。
b)2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含 PCR 扩增所需要的热启动 Taq DNA 聚合酶、dNTP 和 Mg2+等;已混有溴酚蓝染料作为电泳指示剂, PCR 产物可以直接进行电泳。
c)5 × PCR Enhancer :高GC含量扩增(如大于65%)时,建议使用5 × PCR Enhancer。
运输方法
冰袋运输,有效期1年。
保存方式
1. 试剂 10184-A【Lysis Buffer】为动物组织裂解缓冲液,建议保存于2-8℃。
2. 试剂 10184-B【Proteases】为动物组织裂解剂,使用时请勿长久开盖,建议保存于-20℃,避免反复冻融。
3. 试剂 10184-C【2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)】,建议保存于-20℃,避免反复冻融。
4. 试剂 10184-D【5 × PCR Enhancer】,建议保存于-20℃,避免反复冻融。
操作方法
1. 在离心管中加入 200 μL Lysis Buffer和2 μL Proteases,轻轻涡旋混匀。
2. 取约 10 mg(长度2 mm左右)动物组织,置于上述离心管中,轻轻涡旋混匀。
3. 55℃孵育5-30 min,然后 95℃处理5 min。
4. 12000 rpm 离心2 min。
5. 将上清转移至新的离心管,-20℃保存或直接用于 PCR 扩增。
【注】:
a)Lysis Buffer 与 Proteases 混合后尽快使用,不宜长期保存;大量样本操作时,可以将 Lysis Buffer 与 Proteases 按 100 μL:1 μL 的比例混匀备用。
b)组织应取少量并尽量剪碎,以便裂解反应更顺利进行。各组织推荐使用量:鼠尾:长度2-4 mm;鼠趾:1-4个;鼠脏器、脑:直径2-4 mm;斑马鱼、线虫、果蝇等昆虫组织:1-4个;细胞数量:105-108个。斑马鱼、线虫、果蝇等较小样本的组织,可适当减少Lysis Buffer至50-100 μL。昆虫等外壳坚硬的样本,建议剪碎样本并增加Proteases至4 μL。
c)55℃孵育,一般 5 min 即可满足多数 PCR 需求,如鼠尾、鼠耳等组织;若需要的 DNA 量较大或样品较难裂解,可将时间延长至 30 min 或更久;裂解时间可在5-30 min之间调整,组织块不需*裂解,残余的部分在后续离心步骤中可被除去。
PCR反应鉴定——PCR反应体系
组分 | 体积(μL) | 终浓度 |
2× Tissue Direct PCR Mix(With Dye) | 10 | 1 × |
Forward Primer(10 μM) | 0.5 | 0.25 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.5 | 0.25 μM |
裂解产物(DNA模板) | 2 | - |
无菌超纯水 | To 20 | - |
【注】:各组分使用前应充分混匀。
a)模板使用量:建议总体系的5-20%之间,避免超过总体系的20%。
b)引物终浓度:反应性能较差时,推荐在 0.1- 0.5 μM 范围内调整引物浓度。
c)反应体系:推荐使用 20 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
d)体系配制:配制好PCR反应体系,置于涡旋仪上涡旋混匀,瞬时离心将反应液集于管底。
e)对照反应:建议进行PCR时,设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
PCR反应鉴定- PCR反应条件
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 35 |
退火* | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 20 sec | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
*退火温度:请参考引物的理论 Tm 值,退火温度可设置低于引物理论值5℃,或通过梯度 PCR 确定最佳温度。
注意事项:
1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响 PCR 效率。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。
3. 本产品仅作科研用途!
常见问题与解决方法
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
阳性对照、待测样本均无条带。 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4℃短时间存放。 | |
引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。 | 不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
加入组织裂解液过量。 | 增大反应体系,或减少裂解液的用量。 | |
样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液可在4℃保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
模板加入量不适合。 | 在反应体系5-20%范围内优化模板加入量。 | |
PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
非特异性扩增 | PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 提高PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照出现目的条带 | 操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。 |
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Agarose琼脂糖HOT | 10208ES60/76 | 100/500 g |
YeaRed 核酸染料(10,000× 水溶液)HOT | 10202ES76 | 500 μL |
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1 kb DNA ladder HOT | 10510ES60/80 | 100 /10×100 T |
15000 DNA Marker | 10512ES60/80 | 100 /10×100 T |
HB210824