T7 RNA聚合酶(50 U/μL)

10618ES90T7 RNA聚合酶(50 U/μL)

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2022-03-22 15:18:20
787
属性:
供货周期:现货;规格:5000 U;货号:10618ES90;应用领域:生物产业;
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产品属性
供货周期
现货
规格
5000 U
货号
10618ES90
应用领域
生物产业
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

T7 RNA聚合酶产品是噬菌体T7 RNA聚合酶, 以含有T7启动子序列的双链DNA为模板,以NTP为底物,合成与启动子下游的单链DNA互补的RNA。

详细介绍

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

T7 RNA polymerase (50 U/μL)

10618ES90

5000 U

532.00

10618ES96

25000 U

2132.00

10618ES97

50000 U

3832.00

产品描述

本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶,以含有T7启动子序列(5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’)的双链DNA为模板,以NTP为底物,合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板,因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。

注:G*RNA转录的第一个碱基。

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

10618ES90 (5000 U)

10618ES96 (25000 U)

10618ES97 (50000 U)

10618-A

T7 RNA polymerase (50 U/μL)

100 μL

500 μL

1 mL

10618-B

10×Transcription Buffer

400 μL

1 mL ×2

1 mL ×4

注:10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2100 mM DTT,但不含有NTP,如需请购买本公司NTP set solution 10133

产品应用

1. 单链 RNA合成(包括mRNA,siRNA,gRNA等各类RNA前体,以及同位素标记或非同位素标记的RNA探针)

2. 以(Cap analog)为引物合成Capped mRNA

酶活定义

37℃、pH8.0 的条件下,1小时内使1 nmol 的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

运输和保存方法

干冰运输。-20℃保存,有效期一年。

质量控制

核酸外切酶残留检测:100 U 的本酶和 0.5 μg λ DNA-Hind III 酶切产物 37℃下孵育 4 h,DNA 的电泳谱带不发生变化。

切口酶残留检测:100 U 的本酶和 0.5 μg IL23R 质粒,37℃下孵育 4 h,DNA 的电泳谱带无变化。

RNase 残留检测:100 U 的本酶和 0.5 μg 293T 细胞总 RNA,37℃下孵育 4 h,RNA 的电泳谱带无变化。


注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品仅做科研用途!


应用实例

1. 按下列体系配制反应体系

组分

体积(μL)

终浓度

10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus)

2

CTP / GTP/ ATP/ UTP (100 mM each)

0.4 each

2 mM each

T7 RNA Polymerase (50 U/μL)

0.5-1

-

RNase inhibitor (40 U/μL)

1

-

RNase free H2O

Up to 18

-

模板DNA

2 (100 ng-1μg)

-

注:
 ① DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亚精胺,亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。
 ② Buffer和水建议放置到室温,然后开始使用,反应于室温下配制,防止温度低引起亚精胺沉淀高浓度DNA模板。
 ③ 若转录长度< 100 nt,模板投入量可增加至2 μg。
 ④ RNase inhibitor (40 U/μL)请购买本公司产品10603。
 ⑤ 为了特定区域的有效转录,建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。

2. 37℃反应1-2个小时(若转录长度≤ 100 nt,增加时间至4-8 h)。

3. 反应结束后,使用2 U DNaseⅠ(无RNase)37℃ 15分钟去除DNA模板。

4. 转录产物纯化体外转录产物可选用RNA Cleaner磁珠进行纯化(12602),以去除蛋白、盐离子和其他杂质。也可以采用酚/氯仿纯化法(具体操作步骤可联系Yeasen索取)。

操作建议

1.DNA模板的种类:推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。

2.转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板;PCR产物建议采用胶回收纯化后使用。

3.在20 μL反应体系中加入0.02 U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。


HB210929



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