Yeasen/翌圣生物 品牌
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DAPI 4’,6-联脒-2-苯基吲哚
面议Protein A/G Agarose Beads 蛋白A/G琼脂糖珠
面议Bovine Serum Albumin(BSA), DNase, Protease, IgG Fr
面议Anti-Flag亲和纯化凝胶
面议InStab™ Phosphatase Inhibitor Cocktail (100×,
面议HieffLongTaqDNAPolymerase长片段DNA聚合酶
面议Timentin(特美//汀)
面议dNTP Mix (10 mM each)
面议Peroxidase-Conjugated Goat Anti-Mouse IgM , µ
面议Bovine Serum Albumin(BSA), Fatty Acid Free 牛
面议GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂
面议琼脂糖树脂(GST标签蛋白纯化)
¥698Calcein-AM/PI Double Stain Kit
Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Calcein-AM/PI Double Stain Kit Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒 | 40747ES76 | 500 T | 808.00 |
40747ES80 | 1000 T | 1378.00 |
产品描述
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
40747ES76 (500 T) | 40747ES80 (1000 T) | ||
40747-A | Calcein-AM Solution (2 mM) | 50 μL | 50 μL×2 |
40747-B | PI Solution(1.5 mM) | 150 μL | 150 μL×2 |
40747-C | 10×Assay Buffer | 50 mL | 100 mL |
冰袋运输;
其中A组分和B组分需-20℃避光干燥保存,C组分-20℃保存,经常使用可放在4℃保存。一年有效。
使用方法
1. 工作液的配制
1.1 1×Assay Buffer(反应缓冲液)的配制
从低温冰箱内取出10×Assay Buffer,根据单次用量无菌条件取出适量,用去离子水(dH2O)做10倍稀释以得到1×Assay Buffer。
1.2 1×染色工作液的配制
1)先将低温保存的Calcein-AM溶液 (2 mM)和PI溶液(1.5 mM)回到室温20-30 min。
【注意】:*次使用可对母液进行分装,以减少反复冻融次数。
2)取5 µL Calcein-AM溶液 (2 mM)和15 µL PI溶液(1.5 mM)加入5 mL 1×Assay Buffer,充分混匀。此时得到Calcein-AM的工作液浓度为2 μM,PI的工作液浓度为4.5 μM。由于不同细胞系的醉佳染色条件不同,初次实验建议做梯度实验,以确定 Calcein-AM和PI的适浓度。梯度筛选的原则为使用低的探针浓度得到的荧光结果。
【注意】:由于Calcein-AM的稳定性比较差,此染色工作液必须现配现用,并且在当天用完。
2. 染色步骤
2.1 对于贴壁细胞,先用细胞刮刀或者-EDTA消化细胞,之后离心收集细胞(1000 rpm,3 min)。
对于悬浮细胞,直接离心(1000 rpm,3 min)收集细胞。
2.2 去上清,用1×Assay Buffer充分清洗细胞2~3次,以充分去除残留的酯酶活性。
2.3 用1×Assay Buffer制备细胞悬液,使其密度为1×105~1×106细胞/mL。
2.4 取100 µL染色工作液加入200 µL细胞悬液内,混匀,37℃孵育15 min。
【注意】:如果需要,可延长孵育时间至30 min。
2.5 荧光显微镜下使用490±10 nm激发滤片同时检测活细胞(黄绿色荧光)以及死细胞(红色荧光)。另外,使用545 nm的发射滤片仅能观察到死细胞。也可以直接在荧光酶标仪下使用合适的滤片进行检测。
【注意】:可以使用以下方法来优化得到两种荧光染料的*工作浓度。
a)用0.1%皂素或者0.1-0.5% Digoxin 孵育细胞10 min,或者用70%乙醇孵育细胞30 min,从而制备死细胞;
b)用0.1-10 µM的PI溶液进行死细胞染色,以得到仅仅对细胞核染色,而不会对细胞质染色的*工作浓度。
c)用0.1-10 µM的Calcein-AM进行死细胞染色,以得到不会对细胞质染色的*工作浓度。然后用此浓度进行活细胞染色,去观察是否活细胞能被染色。
注意事项
1)由于Calcein-AM对湿度非常敏感,若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后,必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量,分装密封保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。
2)碘化丙啶(PI)有一定的致癌性,操作时一定要注意防护。若接触到皮肤,需要立即用自来水清洗。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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HB181226