Calcein-AM/PI Double Stain Kit

40747ES76Calcein-AM/PI Double Stain Kit

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2023-12-11 18:18:45
4172
属性:
供货周期:现货;规格:500T;货号:40747ES76;应用领域:生物产业;
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产品属性
供货周期
现货
规格
500T
货号
40747ES76
应用领域
生物产业
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂,发绿色荧光(Ex=490nm, Em=515nm)。 因其在传统的Calcein(钙黄绿素)基础上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基团,增加了疏水性,使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后,Calcein-AM(本身不发荧光)被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein,从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。

详细介绍

Calcein-AM/PI Double Stain Kit

Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒


产品信息



产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Calcein-AM/PI Double Stain Kit

Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒

40747ES76

500 T

808.00

40747ES80

1000 T

1378.00


产品描述


Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂,发绿色荧光(Ex=490 nm, Em=515 nm)。 因其在传统的Calcein(钙黄绿素)基础上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基团,增加了疏水性,使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后,Calcein-AM(本身不发荧光)被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein,从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。与其它同类试剂(如BCECF-AM和CFDA)相比,由于Calcein, AM细胞毒性极低,是较适合用于活细胞染色的荧光探针,而且不会抑制任何的细胞功能,如增殖和淋巴球的趋化性。

由于死细胞缺乏酯酶,Calcein-AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。因此,Calcein-AM常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶(PI)等联合使用,同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。碘化丙啶(Propidium iodide,PI)不能穿过活细胞的细胞膜,仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(Ex=535 nm, Em=617 nm),因此PI仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545 nm激发,仅可观察到死细胞。

本试剂盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的双重染料,来进行活细胞和死细胞的双重染色标记,从而进行活细胞和死细胞水平的分析。根据我司优化的实验体系,单次就200 µL细胞悬液进行染色分别可以做500次(CAS: 40747ES76)和1000次(CAS: 40747ES80)检测。


产品组分


编号

组分

产品编号/规格

40747ES76 (500 T)

40747ES80 (1000 T)

40747-A

Calcein-AM Solution (2 mM)

50 μL

50 μL×2

40747-B

PI Solution(1.5 mM)

150 μL

150 μL×2

40747-C

10×Assay Buffer

50 mL

100 mL

运输和保存方法


冰袋运输;

其中A组分和B组分需-20℃避光干燥保存,C组分-20℃保存,经常使用可放在4℃保存。一年有效。


使用方法


1. 工作液的配制

1.1 1×Assay Buffer(反应缓冲液)的配制

从低温冰箱内取出10×Assay Buffer,根据单次用量无菌条件取出适量,用去离子水(dH2O)做10倍稀释以得到1×Assay Buffer

1.2 染色工作液的配制

1)先将低温保存的Calcein-AM溶液 (2 mM)PI溶液(1.5 mM)回到室温20-30 min。

【注意】:*次使用可对母液进行分装,以减少反复冻融次数。

2)5 µL Calcein-AM溶液 (2 mM)和15 µL PI溶液(1.5 mM)加入5 mL 1×Assay Buffer,充分混匀。此时得到Calcein-AM的工作液浓度为2 μM,PI的工作液浓度为4.5 μM。由于不同细胞系的醉佳染色条件不同,初次实验建议做梯度实验,以确定 Calcein-AM和PI的适浓度。梯度筛选的原则为使用低的探针浓度得到的荧光结果。

注意】:由于Calcein-AM的稳定性比较差,此染色工作液必须现配现用,并且在当天用完。

2. 染色步骤

2.1  对于贴壁细胞,细胞刮刀或者-EDTA消化细胞,之后离心收集细胞(1000 rpm,3 min)。

对于悬浮细胞,直接离心(1000 rpm3 min)收集细胞。

2.2  去上清,Assay Buffer充分清洗细胞2~3次,以充分去除残留的酯酶活性。

2.3  Assay Buffer制备细胞悬液,使其密度为1×105~1×106细胞/mL

2.4  取100 µL染色工作液加入200 µL细胞悬液内,混匀,37℃孵育15 min。

注意】:如果需要,可延长孵育时间至30 min。

2.5  荧光显微镜下使用490±10 nm激发滤片同时检测活细胞(黄绿色荧光)以及死细胞(红色荧光)。另外,使用545 nm的发射滤片仅能观察到死细胞。也可以直接在荧光酶标仪下使用合适的滤片进行检测。

【注意】:可以使用以下方法来优化得到两种荧光染料的*工作浓度。

a)用0.1%皂素或者0.1-0.5% Digoxin 孵育细胞10 min,或者用70%乙醇孵育细胞30 min,从而制备死细胞;

b)用0.1-10 µM的PI溶液进行死细胞染色,以得到仅仅对细胞核染色,而不会对细胞质染色的*工作浓度。

c)用0.1-10 µM的Calcein-AM进行死细胞染色,以得到不会对细胞质染色的*工作浓度。然后用此浓度进行活细胞染色,去观察是否活细胞能被染色。


注意事项


1)由于Calcein-AM对湿度非常敏感,若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后,必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量,分装密封保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。

2)碘化丙啶(PI)有一定的致癌性,操作时一定要注意防护。若接触到皮肤,需要立即用自来水清洗。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


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产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒

40747ES76

500 T

659.00

Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒

40747ES80

1000 T

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