Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
2×Hieff 即用型的常规PCR预混液(含染料)
面议qPCR SYBR Green Mix(实时荧光定量)
面议实时荧光定量qPCR预混液(SYBR Green Mix)
面议Hieff qPCR SYBR Green Mix(qPCR预混液)
面议萤火虫荧光素酶报告基因检测试
面议脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺
面议TRIeasy总RNA提取试剂
面议Agarose琼脂糖
¥158高保真DNA聚合酶
面议PCR Enhancer PCR增强剂
面议qPCR SYBR Green Master Mix(实时荧光定量)
面议Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA
面议产品简介
本产品采用DH5α菌株经特殊工艺处理得到得感受态细胞,可用于DNA的化学转化,广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传,适用于蓝白斑筛选。DH5α细胞重组酶recA1和核酸内切酶endA1基因缺失突变使其能保证克隆DNA的稳定性。F-DH5α感受态细胞经特殊工艺制作,无需42℃热激,37℃孵育,只需10 min即可完成一次转化。使用pUC19质粒检测,转化效率约达108 cfu/μg DNA。
DH5α细胞基因型:F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1phoA
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 11803ES80 |
11803-A | F-DH5α 感受态细胞 | 10×100 μL |
11803-B | pUC19 (control vector, 10 pg/μL) | 10 μL |
储存条件
-85℃~-65℃保存,有效期6个月。请勿将本品置于-20℃或液氮中保存。
使用方法
快速转化操作方法(10 min)
1)提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2)将F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出迅速插入冰上,待菌体融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),轻轻弹匀,冰浴静置5 min。
*所加DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
3)用200 μL移液枪将上一步的混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上,均匀涂布。
4)将平板置于37℃培养箱倒置过夜培养。若进行蓝白斑筛选操作,平板在37℃至少倒置培养15 h。
快速热激转化操作方法(25 min,可提高转化效率)
1)将F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出迅速插入冰上,待菌体融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),轻轻弹匀,冰浴静置5 min。
*所加DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
2)42℃水浴热激45 sec,迅速插回冰上静置2 min,此过程不要晃动。加入700 μL不含抗生素的LB,37℃,200 rpm复苏10分钟,均匀涂板。
3)将平板置于37℃培养箱倒置过夜培养。若进行蓝白斑筛选操作,平板在37℃至少倒置培养15 h。
常规热激转化操作方法
1)将F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出迅速插入冰上,冰浴、解冻(大约5 min)。
2)立即向解冻后的感受态细胞悬液中加入目的DNA,轻轻弹匀,冰浴静置25 min。
*所加DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
3)42℃水浴中热激45 sec,然后快速将EP管转移到冰上,静置2 min。
*此过程不要晃动,否则会降低转化效率。
4)向离心管中加入700 μL左右不含抗生素的LB或2YT培养基,混匀后37℃,200 rpm复苏60 min。
5)5,000 rpm离心1 min收集菌体,留取100 μL左右上清涂布至含有相应抗生素的培养板上,37℃培养过夜。如进行蓝白斑筛选操作,请将平板放 37℃培养至少15 h。
注意事项
1. 本产品不可反复冻融,以免降低感受态细胞的转化效率。
2. 本产品在冰中解冻时间不宜过长,感受态细胞刚化冻时转化效率高。
3. 加入质粒应轻柔操作。
4. F-DH5α感受态细胞既可以快速转化也可以常规热激转化,对于>7 kb质粒的构建,为提高转化效率,可采用常规转化方式进行转化。
5. F-DH5α感受态细胞涂氨苄/羧苄抗性平板时效率较高,若涂或其他抗生素平板,转化效率下降(无孵育步骤,等对菌体毒性较大)。若要提高或其他抗性质粒的转化效率,可增加孵育步骤。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7. 本产品仅作科研用途!