Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
2×Hieff 即用型的常规PCR预混液(含染料)
面议qPCR SYBR Green Mix(实时荧光定量)
面议实时荧光定量qPCR预混液(SYBR Green Mix)
面议Hieff qPCR SYBR Green Mix(qPCR预混液)
面议萤火虫荧光素酶报告基因检测试
面议脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺
面议TRIeasy总RNA提取试剂
面议Agarose琼脂糖
¥158高保真DNA聚合酶
面议PCR Enhancer PCR增强剂
面议qPCR SYBR Green Master Mix(实时荧光定量)
面议Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA
面议产品描述
ssDNA Assay Kit 是一种简便、灵敏、精确的单链 DNA(ssDNA)荧光定量检测试剂盒,在 1~200 ng 区间具有良好的线性关系。本试剂盒包含荧光检测试剂、缓冲液及相关的 ssDNA 标准品,使用前先将荧光检测试剂用缓冲液稀释成工作液,然后加入待测 ssDNA 样品,即可使用荧光酶标仪或 Qubit荧光仪进行读数。试剂盒对单链 DNA 的选择度并不高于双链DNA,但它对常规的污染物如蛋白质、盐类物质、洗涤剂等具有较好的耐受性。
产品组分
编号 | 组分名称 | 浓度 | 12645ES60 | 12645ES76 |
12645-A | ssDNA Reagent | 200× in DMSO | 250 μL | 1.25 mL |
12645-B | ssDNA Buffer | Not applicable | 50 mL | 250ml |
12645-C | ssDNA Standard 1 | 0 ng/μL in TE buffer | 1 mL | 5×1 mL |
12645-D | ssDNA Standard 2 | 20 ng/μL in TE buffer | 1 mL | 5×1 mL |
运输和保存
冰袋运输,2-8℃避光保存,有效期1年,请注意避免反复冻融。
注意事项
特别注意:ssDNA Reagent在2-8℃储存条件下为结冰状态,使用时提前放置室温解冻,务必确认溶解,充分混匀后再使用;若有沉淀物,可将该试剂至于 37℃水浴锅中温育, 并轻柔混匀直到沉淀物溶解;
试剂盒对单链 DNA 的选择度并不高于双链DNA,待检样品应避免双链DNA污染;
检测试剂ssDNA Buffer略起泡,使用时轻柔震荡或颠倒混匀,避免剧烈震荡;
荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭;
对于检测试剂和ssDNA标准品,每次使用前轻柔震荡或上下颠倒数次后瞬时离心数秒(请勿涡旋振荡);
为保证定量结果的精确,请使用校准后的移液器操作,样品浓度较低时请增大待测样品投入体积;
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
本产品仅用作科研用途!
实验步骤
使用Qubit荧光仪进行ssDNA定量检测分析
实验准备
使用前,将试剂盒中的各组分恢复至室温(室温放置约半小时),检查ssDNA Reagent(组分A)是否有沉淀,若有沉淀物,可将该试剂至于37℃水浴锅中温育,并轻柔混匀直至沉淀物溶解;
准备足够量0.5 mL PCR薄壁管并标注。请勿在PCR管侧壁标注,以免影响荧光信号采集。推荐使用本公司Qubit专用检测管(货号83509ES)
配制检测工作液在避光塑料容器中,使用ssDNA Buffer按比例将适量ssDNA Reagent稀释至1×(例:取1 μL ssDNA Reagent,加入199 μL ssDNA Buffer),上下颠倒混匀。工作液现用现配,每次配制检测工作液时要使用洁净的容器;
配制待检样品
配制待检标准品1和标准品2:取190 μL检测工作液至标准品PCR管中,分别加入10 μL ssDNA Standard 1和ssDNA Standard 2至相应标记的标准品PCR管中,轻柔涡旋振荡2-3 sec,尽量避免气泡产生,瞬时离心数秒;
配制待检样品:取180-199 μL检测工作液至样本PCR管中,分别加入20-1 μL待检样本,使PCR管中每个样本终体积为200 μL,轻轻涡旋振荡2-3 sec,尽量避免气泡产生;
检测
将所有待检PCR管置于室温避光孵育2 min;瞬离收集管壁上液体。
按照Qubit荧光仪的操作说明,选择ssDNA检测程序,使用待检标准品校正荧光曲线后进行待检样品的浓度测定。
附表1
污染物对ssDNA定量检测试剂盒检测结果的影响
污染物 | 样品检测时浓度 | 10 µL样品中的浓度 | 检测结果 |
Proteins | |||
牛血清白蛋白 | 50 mg/mL | 1 mg/mL | OK |
Salts | |||
氯化钠 | 2.5 mM | 50 mM | OK |
氯化镁 | 0.1 mM | 2 mM | OK |
醋酸钠 | 1 mM | 20 mM | OK |
醋酸铵 | 1 mM | 20 mM | OK |
Organic Solvents | |||
乙醇 | 0.5% | 10% | OK |
氯仿 | 0.1% | 2% | OK |
benfen | 0.01% | 0.2% | OK |
Detergents | |||
Triton X-100 | 0.005% | 0.1% | OK |
HB230412