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黄曲霉素是曲霉菌属的黄曲霉和寄生曲霉的二次代谢产物。这些霉菌来源于潮湿的热带地区,大面积种植的粮食作物会被其污染。黄曲霉素是自然界危险的致癌物质。
黄曲霉素中性较强的是黄曲霉素B1,其几乎一直和黄曲霉素B2、G1 和 G2共存。他们主要存在于玉米、花生、坚果、棉籽等食物中。美国食品和药品监督管理局(FDA)已对食品和饲料中的黄曲霉素高允许水平作了规定,因此,准确测定黄曲霉素含量对于食品和饲料的品质监控具有重要意义。
黄曲霉素B1ELISA检测试剂盒采用竞争ELISA,在微孔板上预包被黄曲霉素B1抗原,加入样本/黄曲霉素B1标准品溶液及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉素B1抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉素B1与预包被在微孔板上的黄曲霉素B1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉素B1抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液,读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉素B1抗原的含量成负相关。对照标准曲线,即可得出相应残留物黄曲霉素B1的含量。
【注意事项】
1. 室温低于20℃或试剂及样本没有恢复到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3. 每种试剂使用前均需摇匀。
4. 反应终止液为0.5M硫酸,避免接触皮肤。
5. 不要使用过了有效期的试剂盒;也不要掺杂使用过了有效期的试剂盒;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6. 储存条件:
试剂盒保存于2~8℃,不能冷冻,将不用的微孔板重新真空密封。标准物质和无色的显色剂对光敏感,因此要避光保存。
7. 试剂变质的迹象:
显色试剂有任何颜色表明显色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8. 加入显色液后,一般显色时间为15~30min。若颜色较浅,可延长反应时间到35min(或更长),但不得超过40min。反之,则减短反应时间。
9. 黄曲霉素B1ELISA检测试剂盒反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。