细胞自噬检测试剂盒   BB-48131-1

细胞自噬检测试剂盒 ：

使用限制： 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

产品更新： 贝博会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。

           需要电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。

使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

质量控制： 贝博对每批产品进行严格测试以确保产品质量*。

知识产权： 贝博^TM BBcellProbe^TM系列试剂盒及其使用方法包含专有技术。

注意事项：

• 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
• 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
• 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
• 使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并*清除残留清洁剂。
• 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

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产品技术问题可发邮件至bestbio咨询。

如果您有任何关于产品性能或者新应用和技术的建议，欢迎您随时。

产品简介：

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，zui终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是溶酶体介导的胞内降解途径，是真核细胞在恶劣环境（比如营养缺乏）威胁时引发的降解和细胞内容物再循环的过程。这一途径在对各种应激条件进行应答从而在促进细胞内环境平衡、能量平衡和细胞存活上具有重要的作用，更多的证据表明自噬功能与多种疾病密切相关，包括癌症、神经退行性疾病、糖尿病、自身免疫性疾病和心血管疾病。

贝博^TM BBcellProbe^TM 细胞自噬检测试剂盒是采用MDC染色法染色细胞内自噬体的检测试剂盒，该产品可代替传统LC3-GFP法，通过荧光示踪物来选择性检测自噬通路中的各种囊泡包括自噬前体、自噬体和自溶酶体，用于流式细胞仪，无需转染，就能在荧光显微镜下跟踪活细胞的自噬过程进行定量分析，或用流式细胞仪进行高通量筛选，甚至能标记原代细胞。并且该产品可以进行自噬通路的动力学分析，为研究者展现自噬体形成和消除之间的动态平衡。

贝博^TM BBcellProbe^TM 细胞自噬检测试剂盒中的BBcellProbe^TM MDC自噬体染色探针为绿色荧光标记的自噬体探针，具有335nm / 518nm的zui大激发/发射波长。

贝博还可以为您各种BBcellProbe^TM N系列、M系列、E系列、G系列和BBcellProbe^TM L系列细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体、内质网等细胞亚结构荧光染色试剂盒，以及钙离子、钠离子、神经细胞等各种荧光染色试剂盒产品。

产品特点：

• 无需转染，可在活细胞内定量检测细胞自噬情况，可在活细胞内定量检测自噬小泡和监控活细胞自噬流（自噬体的合成、自噬底物到溶酶体的运输、自噬底物在溶酶体的降解过程）；
• 适用于流式细胞检测和显微镜分析；
• 可用于高通量筛选自噬的激活剂和抑制剂；
• 可选择性地对前自噬体、自噬体和自噬性溶酶体进行染色，而对溶酶体染色较少。

试剂盒以外自备试剂和仪器

● PBS         ● 离心机

● 荧光显微镜/激光共聚焦显微镜/荧光酶标仪等

使用方法：

使用注意事项：

• MDC染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
• 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
• 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
• 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定*条件。以下方法仅供参考。
• 染色后立即进行分析。

1. 染色工作液配制：

根据样本数量，用检测缓冲液将MDC荧光染料10倍稀释，再用相应的培养基或者HBSS缓冲液40-200倍稀释，配制成染色工作液。

【注】:

• 也可以直接用相应的培养基或HBSS等缓冲液稀释MDC染料至所需浓度。
• 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。开始实验前，使用培养基或HBSS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的*工作浓度，一般染色终浓度400-2000倍稀释。
• 工作液现配现用。
• 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

1. 细胞染色

2.1 对于贴壁细胞

1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。

2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含MDC探针工作液。于生长状态下孵育15分钟-1小时（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。

3）利用新鲜培养基或PBS替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。

【注】:

• 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

2.2 对于悬浮细胞

1）离心，吸除上清。

2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育15分钟～1小时（具体时间需根据细胞类型而定）。

3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液或PBS重悬细胞。

4）置于荧光镜下观察或流式检测。

【注】:

• 对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经细胞粘合剂处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
• 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

3、观察结果：

在荧光显微镜（含合适滤片）/酶标仪/流式细胞仪下观察细胞。

zui大激发/发射波长为335/518 nm。

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