细胞内钙离子检测试剂盒     BB-48113-1

细胞内钙离子检测试剂盒   

使用方法：

使用注意事项：

• 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
• 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
• 染色后立即进行分析。
• BBcellProbe^TM FL4探针容易受潮，稳定性较差，注意干燥保存。
• BBcellProbe^TM FL4探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
• 未使用完的BBcellProbe^TM FL4探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。母液遇水极易分解，如果*不用，建议根据每次使用量分装保存，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
• BBcellProbe^TM FL4探针工作液含水，配制后不可以*保存，须现配现用。
• BBcellProbe^TM FL4融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。
• 可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液（可选步骤），Pluronic F127 可以帮助BBcellProbe^TM FL4更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中*保存BBcellProbe^TM FL4溶液。
• 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定*条件。以下方法仅供参考。

1. 染色工作液的配制：

用 HBSS 稀释 BBcellProbe^TM FL4溶液400倍-4000倍，配制成BBcellProbe^TM FL4染色工作液。

【注】：*该探针加载浓度在400-4000倍稀释，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。

为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用zui低探针浓度。

工作液需现配现用，避免反复冻存。

1. 收集培养好的待测细胞样本，用HBSS洗涤细胞3次。
2. 离心去上清后，将 BBcellProbe^TM FL4染色工作液加入细胞，在37℃孵育20 -60分钟。

【注】：关于孵育的时间，*预实验不能确定，建议先孵育30分钟。

根据荧光效果：如果太强，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

染色工作液加入量以覆盖细胞即可。

1. 加入 5 倍体积的含有1%胎牛血清的 HBSS，再继续孵育40分钟。
2. 用HBSS洗涤细胞2-3次。用HBSS重悬细胞
3. 37℃下孵育10 分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长 488-495nm，发射波长516nm。

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