NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
货号：BC1040
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入360 μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；

2. 试剂三：临用前加入327 μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。

具体操作步骤详和产品说明 见“产品资料”附件

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

注意事项：

1. 粗酶液的提取必须在0℃- 4℃中操做完成，以防止酶变性失活。

2. 实验时，试剂二、试剂三和样本在冰上放置，以免变性和失活。

3. 当初始读值小于0.7或者ΔA大于0.5时建议稀释后测量。

4. 建议一人加样一人比色。

实验实例：

1. 取0.05g大鼠肝脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管=A1测定-A2测定=0.917-0.293=0.624，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.789-0.784=0.005，按样本质量计算酶活得： NAD-MDH（U/g 质量）=6431×(ΔA测定-ΔA空白) ÷W=6431×0.619 ÷0.05=79616 U/g 质量。

2. 取0.05g柳树叶加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管=A1测定-A2测定=0.812-0.741=0.071，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.789-0.784=0.005，按样本质量计算酶活： NAD-MDH（U/g 质量）=6431×(ΔA测定-ΔA空白) ÷W=6431×0.066 ÷0.05=8489 U/g 质量。

3. 取20μL小鼠血浆直接按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管=A1测定-A2测定=0.855-0.789=0.066，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.789-0.784=0.005，按血清/血浆体积计算酶活得： NAD-MDH（U/mL）=6431×(ΔA测定-ΔA空白)=6431×0.061=392 U/mL。

参考文献：

1. Yao Y X, Li M, Zhai H, et al. Isolation and characterization of an apple cytosolic malate dehydrogenase gene reveal its function in malate synthesis[J]. Journal of plant physiology, 2011, 168(5): 474-480.

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