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黄嘌*氧化酶(XOD)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC1090
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体75 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体3.5mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂五 | 液体25mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂六 | 液体25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
试剂三:临用前根据样本量用试剂二稀释5倍后备用。用不完的试剂2-8℃可保存1周。
标准品:10μmol/mL 亚*。
产品说明:
XOD(EC 1.17.3.2)催化黄嘌*氧化生成尿酸和超氧阴离子,是活性氧主要来源之一;同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心、肺、肝脏等组织中,当肝功能受损时,XOD大量释放到血清中,对肝损害的诊断具有特异性的意义。
XOD催化次黄嘌*产生黄嘌*和超氧阴离子,超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-在对*磺酰胺和*盐酸盐的作用下,生成紫红色的偶氮化合物,在530nm有特征吸收峰,根据其生成量可反映XOD活性的大小。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、匀浆器/研钵、细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料”附件
实验实例:
取0.1011g兔肾脏加入1mL试剂一进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上,之后按照测定步骤操作,用1mL比色皿测得计算∆A样本=A测定管-A空白管=0.177-0.002= 0.175,∆A标准=A标准管-A空白管=0.470-0.002=0.468,按样本质量计算酶活得:
XOD活性(U/g 质量)= 12.5×∆A样本÷∆A标准÷W×F =46.23 U/g 质量。
取0.01mL牛奶,加入0.99mL试剂一,即稀释100倍后直接测定,之后按照测定步骤操作,用1mL比色皿测得计算∆A样本=A测定管-A空白管=0.013-0.002= 0.011,∆A标准=A标准管A空白管=0.470-0.002=0.468,按样本质量计算酶活得:
XOD活性(U/mL)= 12.5×∆A样本÷∆A标准×F =29.38 U/mL。
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