Yeasen/翌圣生物 品牌
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2×Hieff 即用型的常规PCR预混液(含染料)
面议qPCR SYBR Green Mix(实时荧光定量)
面议实时荧光定量qPCR预混液(SYBR Green Mix)
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¥158高保真DNA聚合酶
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面议qPCR SYBR Green Master Mix(实时荧光定量)
面议Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA
面议产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL) | 10300ES80 | 1000 U | 425.00 |
Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL) | 10300ES97 | 50000 U | 18654.00 |
产品描述
Hieff® Gold T4 DNA Ligase在ATP做辅酶的情况下可催化dsDNA 平末端或粘性末端相邻核酸的5’磷酸末端和3’羟基末端形成磷酸二酯键,还可催化RNA和双链中的ssDNA 或RNA 链连接,但不能催化全单链核苷酸间的连接。
本品主要适用于标记RNA 3’-末端,环化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品货号(规格) | |
10300ES80(1000 U) | 10300ES97(50000 U) | ||
10300-A | Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL) | 200 µL | 10 mL |
10300-B | 10 × Ligase Buffer | 400 µL | 20 mL |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。
单位定义
在20 μL的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind Ⅲ 分解物在16℃下反应30 min时,催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制
核酸外切酶残留检测:10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。
切口酶残留检测:10 U本品和0.5 μg IL23R质粒,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。
注意事项
1)Buffer在融解时,如果出现少量沉淀属正常现象,请颠倒混匀后使用。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3)本产品仅作科研用途!
使用方法
1. 在无菌微量离心管中配制以下反应体系:
组分 | 使用量 |
载体DNA | 50-100 ng |
插入片段 | 片段与载体的分子摩尔比应在3:1-5:1 |
10 × Ligase Buffer | 2 µL |
Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL) | 1 µL |
ddH2O | To 20 µL |
【注】:平末端载体与DNA片段进行连接时,应先将载体进行去磷酸化处理,以防发生自连接现象。为提高连接效率,每20 µL反应体系中可以加2 µL 50% PEG 4000。
2. 16℃反应过夜。
3. 转化实验
1)将连接产物加入到100 µL 感受态细胞中(连接产物不应超过感受态细胞的1/10),轻弹混匀,冰上孵育30 min。
2)将离心管于42℃,热激90 sec(不要晃动),之后立刻置于冰水浴静置2-3 min。
3)向离心管中加入900 µL LB或SOC培养基,37℃,150 rpm,振荡培养45 min,该过程使菌体复苏,抗性基因表达。
4)2500 g 离心5 min,吸去900 µL上清,用剩余培养基重悬菌体,用无菌涂布棒将剩余菌体在正确抗性的平板上涂布均匀,待菌液被平板吸收后,37℃倒置培养过夜。
【注】:如果使用超级感受态细胞(转化效率>108 cfu/µg),可直接吸取100-200 µL 37℃孵育后的菌液涂板,剩余菌液可在4℃保存,1周内均可重新涂板。
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