Yeasen/翌圣生物 品牌
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上海市所在地
Hifair® V Reverse Transcriptase
第五代耐热逆转录酶(无甘油版)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 |
Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶(无甘油版) | 11301ES12 | 12 KU | 1952.00 |
Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶(无甘油版) | 11301ES75 | 300 KU | 28652.00 |
产品描述
Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
11301ES12 (12 KU) | 11301ES75 (300 KU ) | ||
11301-A | Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL) | 20 μL | 500 μL |
产品应用
一步法RT-qPCR;基因克隆;荧光定量。
活性定义
以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制
核酸外切酶残留检测:200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ,37℃下孵育1 h,DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测:200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA,37℃下孵育1 h,DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测:200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA,37℃下孵育1 h,RNA电泳谱带不发生变化。
运输与保存方法
冰袋运输。4℃保存。效期6个月。
注意事项
1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;
2)所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解;
3)为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本;
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
第—链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第—链cDNA的产量。)
组分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | To 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 ng/μL) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL |
or 1 μL | |
or 1 μL | |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng |
65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)
组分 | 使用量 |
上一步的反应液 | 13 μL |
5×Hifair® V Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL) | 200 U |
RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
RNase free ddH2O | To 20 μL |
3. 逆转录程序设置
温度 | 时间 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 15-30 min |
85℃ | 5 min |
【注】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略。
2)逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50-55℃。
3)85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。
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HB200407