Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit（加A法） A尾法miRNA第一链cDNA反转录试剂盒 | 11148ES10 | 10 T | 995.00 |
11148ES50 | 50 T | 3,985.00 |
产品描述
microRNA是一类被广泛关注的非编码RNA，长度为22 nt左右，对植物和动物的基因表达有着非常重要的调控作用。A尾法miRNA第一链cDNA反转录试剂盒本试剂盒采用加A尾法来进行miRNA第一链cDNA的反转录，产品中的2×Hifair® miRNA RT buffer包含了miRNA加A尾反应和逆转录反应的所有原料和引物，并经过精心优化，可保证miRNA 3'末端的Poly(A)修饰过程和逆转录过程同时高效进行。
本产品推荐与本公司的Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix（Cat#11171）配套使用，以获得*的实验结果。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品规格 | |
11148ES10(10 T) | 11148ES50(50 T) | ||
11148-A | Hifair® miRNA RT enzyme mix | 17.5 μL | 87.5 μL |
11148-B | 2×Hifair® miRNA RT buffer | 50 μL | 2.5 mL |
11148-C | RNase-free H2O | 2 mL | 100 mL |
11148-D | Universal Reverse Primer (10 μM) | 40 μL | 2 mL |
11148-E | U6 Forward Primer (10 μM) | 40 μL | 200 μL |
11148-F | U6 Reverse Primer (10 μM) | 40 μL | 200 μL |
运输与保存方式
操作步骤
一、体系配制
室温融化Hifair® miRNA RT enzyme mix和2×Hifair® miRNA RT buffer后轻微颠倒混匀，置于冰上并按下表配置反应体系：
组分 | 体积 (μL) | 终浓度 |
2×Hifair® miRNA RT buffer | 5 | 1× |
Hifair® miRNA RT enzyme mix | 1.75 | - |
RNA* | - | X |
RNase-free H2O | Up to 10 | - |
*总RNA及提取的miRNA的浓度范围10 pg-2 μg，合成的miRNA拷贝数低可达60 copies，投入体积不超过3.25 μL。
二、逆转录程序
移液器轻轻混匀上述配制的反应液，按下表程序进行miRNA的逆转录反应：
反应温度 | 反应时间 | 备注 |
37℃ | 50 min | miRNA加A尾及反转录过程 |
85℃ | 5 sec | 酶失活过程 |
【注】：逆转录产物可直接进行下游qPCR检测。为避免逆转录体系对qPCR反应的抑制，可将产物稀释10-1000倍后使用。若短时间内不进行下游实验，可放置于-20℃保存。若长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
注意事项：
1）使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
2）实验时，请使用无RNase污染的耗材，避免不必要的损失影响实验结果。
3）本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
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