Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
产品简介
Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到新逆转录酶，与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。
产品信息
货号 | 11300ES92 / 11300ES93 / 11300ES98 |
规格 | 10,000 U / 5×10,000 U/ 200,000 U |
单位定义 | 以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。 |
组分信息
组分编号 | 组分名称 | 11300ES92 | 11300ES93 | 11300ES98 |
11300-A | Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 mL |
11300-B | 5×Hifair® V Buffer | 250 μL | 1.25 mL | 5 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期2年。
使用说明
第一链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
组分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | to 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL or 1 μL or 1 μL |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng |
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。短暂离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
组分 | 使用量 |
上一步的反应液 | 13 μL |
5×Hifair® V Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
3. 逆转录程序设置
温度 | 时间 |
25℃* | 5 min |
42℃** | 15~30 min |
85℃*** | 5 min |
*当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
**逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至50~55℃。
***85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
该逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR，推荐每25 μL反应体系，添加10-20 U逆转录酶，也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。
注意事项
1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。
2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解。
3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本。
4. 本产品仅用作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
