INTERFERin^®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent

INTERFERin^® siRNA/miRNA体外转染试剂

产品信息

产品描述 

INTERFERin^®是Polyplus公司提供的一款非脂质体PEI阳离子、两性分子转染试剂，专门为将siRNA/miRNA转染到哺乳动物细胞中而开发。这种转染试剂包裹siRNA或miRNA形成阳离子复合物，该复合物与细胞表面带负电的蛋白聚糖相互作用吸附在细胞表面，通过内吞进入细胞，形成内含体。该转染试剂具有质子海绵的作用，能够吸收溶酶体中的H⁺，质子的不断流入，导致复合体肿胀破裂，从而使外源siRNA或miRNA释放到细胞质中。

INTERFERin^®可在广泛的细胞系中，实现1 nM的siRNA超过90%的表达效率，避免了脱靶效应。适用于多种细胞转染，包括Hela、MCF-7、NIH-3T3等贴壁细胞；对于难以转染的悬浮细胞系，如K562或THP-1细胞，siRNA终浓度为5nM时，可达到80%的沉默效率；同时还可以转染原代人成纤维细胞和原代人肝细胞等，可达到80%的沉默效率。除此之外，也可根据转染的细胞系、核酸种类、转染时间等，登录Polyplus公司的网///址，搜索该产品引文数据库。Polyplus数据库提供了400多种的转染条件数据可供参考，Polyplus：w/w/w.polyplus transfection.c/o/m.

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品4 ºC保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1）整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。

2）转染前，确保siRNA/miRNA是经过PAGE纯化和脱盐处理过的，高纯度的siRNA或者miRNA有助于获得较高的转染效率。

3）INTERFERin^®转染试剂应该在4 ºC保存，要注意避免多次反复长时间开盖，否则可能会导致转染试剂挥发，降低转染效率。

4）转染前一天，确保接种贴壁细胞密度在30%-50%，对于一些小细胞和生长缓慢的细胞，接种密度可适当扩大2倍。

5）转染前，确保siRNA/miRNA基因沉默表达不会影响细胞活力。

6）该产品只适合体外转染，不能用于体内转染。

操作流程

一．贴壁细胞转染（以24孔板和转染1 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表1）

为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，接种细胞密度建议30%-50%，建议初次使用时设置梯度进行优化//佳使用量。

【注】：由于靶基因、细胞类型、siRNA效价、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周转率等因素，均会影响siRNA的转染效率。建议选取siRNA浓度在1 nM到10 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表1。

表1 siRNA终浓度为1 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

表2 siRNA终浓度为10~50 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

二．悬浮细胞转染（以24孔板和转染5 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表4）
接种细胞

1.为了优化悬浮细胞转染条件，与贴壁细胞相比，需要降低悬浮细胞的培养基的体积。根据培养皿大小和完整培养基的体积，推荐的接种悬浮细胞的数量如下表3所示。

表3 转染当天，根据培养皿的大小，接种悬浮细胞数量参考值

2.按照以下体系配制siRNA-INTERFERin^®复合物： 

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释21 ng siRNA (1.5 pmols)，混匀。

2）向100 μL的siRNA中加入4 μL的转染试剂，立刻旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温孵育15 min，使得形成siRNA-INTERFERin^®复合物。
【注】：孵育时间不要超过30 min

4）在每孔200 μL细胞悬浮液中，加入100 μL的siRNA-INTERFERin^®复合物，轻轻混匀。终体积为300 µL，siRNA终浓度为5 nM。

5）37 ℃，5% CO₂培养箱培养4-6 h后，再加入700 µL*培养基，轻轻摇动培养板使其混匀。

6）继续放入培养箱中孵育，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24-72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

【注】：为了优化内源性基因沉默，建议选取siRNA浓度在5 nM到20 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表4。

表4 siRNA浓度为5 nM时，在悬浮细胞中的参考值

表5 悬浮细胞中siRNA浓度、转染试剂的用量参考值

三．miRNA转染操作流程
该转染试剂也适合转染miRNA，转染贴壁细胞和悬浮细胞的具体操作请参考siRNA的操作流程。

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