产品信息

产品描述

文库构建专用接头试剂盒是Hieff NGS^® Stubby UDI Primer Kit for Illumina^®是Illumina高通量测序平台文库构建专用接头试剂盒，包含二代测序建库中使用的PE adapter以及12/96/192/384种UDI Primer。该试剂盒提供的UDI Primer为I5、I7 Primer预混液，配合DNA Library Prep Kit for Illumina^®使用，可构建多达384种双端Index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存，有效期1年。

注意事项

1）本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2）本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDI Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。

3）本试剂盒有四种规格，分别提供12/96/192/384种UDI Primer，可以构建多达384种双端Index标记文库。

4）切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25°C。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4°C。

5）使用Hieff NGS^® Stubby UDI Primer Kit for Illumina^®试剂盒构建的DNA文库结构如下：

6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7）本产品仅作科研用途！

使用方法

本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ^® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina^® 试剂盒操作说明进行。

接头连接 (Adapter Ligation)

在末端修复产物两端连接特定的Illumina^®接头，即Hieff NGS^® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina^®操作步骤3.2。

1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量；

表1 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度

【注】：Input DNA 摩尔数 (pmol)≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度 (bp)]

2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；

3. 配制表2所示反应体系；

表2 Adapter Ligation反应体系

【注】：*Ligation Enhancer比较粘稠，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。

**本公司接头浓度 (Cat#12404；Cat#12405；Cat#12406；Cat#12407)与常规商业化试剂盒一致，皆为15 μmol/L。

4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；

5. 将PCR管置于PCR仪中，设置表3所示反应程序，进行接头连接反应：

表3 Adapter Ligation反应程序

【注】：当Input DNA量较低，实验效果不理想时，可尝试将连接时间延长一倍。

连接产物磁珠纯化 (Post Ligation Clean Up)

该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的Adapter或Adapter Dimer等无效产物，分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要，详细操作步骤参照Hieff NGS^® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina^®建库试剂盒说明书。

文库扩增 (Library Amplification)

该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集，使用本试剂盒接头时，该步骤为必做步骤；

1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；

2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系；

表4  PCR扩增反应体系

【注】：文库扩增引物来自Yeasen接头引物试剂盒 (Cat#12404；Cat#12405；Cat#12406；Cat#12407)。

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；

4. 将PCR管置于PCR仪中，设置表5所示反应程序，进行PCR扩增：

表5  PCR扩增反应程序

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