Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
Hieff NGS® Ultima Pro PCR Free DNA Library Pr
¥2475phi29 DNA Polymerase (10 U/μL)
¥585Recombinant Ten-Eleven Translocase
¥1555Recombinant Ten-Eleven Translocase (TET)14
¥1555Recombinant APOBEC3A (A3A) Protein
¥13354×Multiplex PCR Master Mix for Pathogen
¥725Hieff NGS® G-Type In-Situ DNA Binding Profili
¥2855Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polym
¥3015E. coli DNA ligase (60 U/μL)
¥554× Frag/Prime Buffer
¥102Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for
¥3155文库构建专用接头试剂盒
¥515
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit mRNA纯化试剂盒 | 12603ES24 | 24 T | 616 |
12603ES96 | 96 T | 2266 |
Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit是翌圣生物自主研发的专门用于纯化mRNA的磁珠试剂盒。其中的mRNA Capture beads为偶联了Oligo(dT)的微米级顺磁性微球,通过与带有poly(A)尾巴的mRNA相结合,将mRNA从10 ng-4 μg完整度良好的总RNA中进行分离纯化。
产品组分 | 组分名称 | 12603ES24 | 12603ES96 |
12603-A | mRNA Capture Beads | 1.2 mL | 4.8 mL |
12603-B | Beads Binding Buffer | 1.2 mL | 4.8 mL |
12603-C | Beads Wash Buffer | 15 mL | 60 mL |
12603-D | Tris Buffer | 1.2 mL | 4.8 mL |
12603-E | Nuclease-free water | 1 mL | 4 mL |
冰袋运输。
2-8℃保存,有效期一年。避免冷冻!
1.磁珠使用前务必要回温至室温,并充分混匀,否则可能影响样品的回收效率。
2.操作过程要严格保证无RNase和核酸污染。
3.本产品和其他试剂配套使用时,请按照具体实验说明来进行操作。
4.想要获得好的纯化效果,需要有完整度良好的总RNA,确保RIN值在7.0及以上。
5.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
6.本产品仅用作科研用途!
一、自备材料
磁力架,Nuclease-free离心管。
二、操作流程
图1 .mRNA纯化试剂盒操作流程
三、操作步骤
3.1 实验前准备
将mRNA Capture Beads从2-8℃取出,静置使其温度平衡至室温(约30 min)。
3.2 样本准备
在一个Nuclease-free PCR管中,用Nuclease-free water将10 ng-4 μg总RNA稀释至50 μL,冰上放置备用。
3.3 mRNA与磁珠的结合
① 颠倒或涡旋振荡混匀磁珠,吸取50 μL磁珠悬液加入至50 μL 总RNA样品中,用移液器反复吹打6次,
使其充分混匀。
② 将磁珠与RNA的混合物置于PCR仪中,65℃,5 min;25℃,5 min;25℃,hold,完成RNA与捕获磁珠的结合。
③ 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,使mRNA与总RNA分离,小心移除上清。
3.4 样本的洗涤
① 将样品从磁力架上取出,加入200 μL Beads Wash Buffer重悬磁珠,用移液器反复吹打6次以*混匀。
② 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,小心移除上清。
③ 重复上一步骤,共洗涤两次。
3.5 mRNA样本第一轮洗脱
① 将样品从磁力架上取出,加入50 μL Tris Buffer重悬磁珠,用移液器反复吹打6次以*混匀。
② 将样品放置于PCR仪中,80℃,2 min;25℃,hold,将mRNA洗脱下来。
3.6 mRNA与磁珠的再次结合
① 将样品从PCR仪中取出,加入50 μL Beads Binding Buffer,用移液器反复吹打6次以*混匀。
② 室温孵育5 min,使mRNA结合到磁珠上。
③ 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,小心移除上清。
3.7 样本的洗涤
将样品从磁力架上取出,加入200 μL Beads Wash Buffer重悬磁珠,用移液器反复吹打6次*混匀,将样品重新放回至磁力架中,室温静置5 min,然后吸除全部上清。
【注】:最后需要用10 μL移液器吸干净残留液体。
3.8 mRNA样本终洗脱
方案一:用于逆转录反应。
将样品从磁力架上取出,加入12 μL Nuclease-free water重悬磁珠,用移液器吹打6次以*混匀。将样品置于PCR仪中80℃,2 min后,立即置于磁力架上,室温静置5 min。待溶液澄清后,小心吸取10 μL上清至另一新的Nuclease-free PCR管中。
方案二:用于RNA文库的构建。
可根据相关试剂盒说明书加入相应体积的Frag/Primer Buffer,进行文库构建。
【注】:样品可置于冰上继续进行NGS文库构建或其他分析应用(建议立即进行后续反应),也可以置于-80℃保存。
HB210923