4×Multiplex PCR Master Mix for Pathogen

13592ES4×Multiplex PCR Master Mix for Pathogen

参考价: ¥725

具体成交价以合同协议为准
2023-11-28 14:01:36
228
属性:
供货周期:现货;应用领域:医疗卫生,生物产业;
>
规格:
24 T;
>
产品属性
供货周期
现货
应用领域
医疗卫生,生物产业
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4×Multiplex PCR Master Mix for Pathogen

参考价: ¥725

24 T 725元 10 件可售
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

本产品适用于多重PCR实验。4×Multiplex PCR Master Mix for Pathogen以热启动多重Taq酶制剂与4×扩增缓冲液为组分配置成预混液。本预混液可快速便捷地用于多重PCR反应,扩增子GC含量25-75%范围内可以有效扩增。具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点,同时严控背景菌。本试剂可兼容30~100对以内不同大小片段的多重扩增,也可用于进行数千重及以上扩增子的捕获。

详细介绍

产品描述

 

本产品适用于多重PCR实验。4×Multiplex PCR Master Mix for Pathogen以热启动多重Taq酶制剂与4×扩增缓冲液为组分配置成预混液。本预混液可快速便捷地用于多重PCR反应,扩增子GC含量25-75%范围内可以有效扩增。具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点,同时严控背景菌。本试剂可兼容30~100对以内不同大小片段的多重扩增,也可用于进行数千重及以上扩增子的捕获。可应用病原微生物检测、环境微生物鉴定、食品安全检测等多个应用场景。

 

运输与保存方式

 

冰袋运输。-25 ~ -15储存,有效期2年。

 

实验流程

 

  1. 推荐反应体系:

一轮反应体系

组分

体积(μL)

终浓度

4×Hieff® Multiplex PCR Master Mix for Pathogen

7.5

1×

Primer mix

x

0.02 μM-0.5 μM

模板DNA

x

1 ng-400 ng

无菌超纯水

x

-

总体积

To30


【注】

1上表中DNA量和引物浓度均为推荐用量和浓度,可根据具体实验情况进行调整最适浓度。

2)参考建议:每条引物的浓度可在0.02 μM-0.5 μM范围内进行调整。

3)预混液中已经包含扩增所需要的酶、dNTP、盐离子等,无需额外添加。

二轮反应体系

组分

体积(μL

终浓度

2×Hieff® Multiplex PCR Master Mix for Pathogen(Cat.13581)

15

1×

Primer Index mix

4(~6 pmol)


一轮纯化产物

11


无菌超纯水

x

-

总体积

To 30


 

  1. 推荐反应程序:

循环步骤

温度(℃)

时间

循环数

预变性

95

3 min

1

变性

95

30 sec

X

退火

60℃

30 sec

延伸

72

30 sec

终延伸

72

3 min


暂存

4℃

-

1

【注】

  1. 退火时间可以根据Panel种类不同,进行适当延长,或者是梯度退火,比如64℃ 1 min,60℃ 1 min;

  2. 延伸时间以最长片段为准。延伸时间太长会导致非特异性扩增增多,可通过缩短延伸时间来提高扩增特异性,延伸时间不少于30 sec。 

  3. 针对模板含量较低的样本,可通过增加循环数提高扩增产出。

  4. Panel引物重数较多时可增加退火时间,调整梯度退火程序,或者根据已有Panel的合适的PCR反应程序进行测试。

  1. 循环数推荐:

单管引物重数

推荐循环数

10 ng gDNA )

退火延伸时间

一轮

二轮

10-50

10~28

18~28

30 s~2 min

50-200

10~28

16~28

30 s~2 min

200-800

10~28

14~28

30 s~2 min

800以上

10~28

12~28

30 s~4 min

【注】

上表是基于10 ng gDNA进行的一轮及二轮循环数的推荐;当投入量大于10 ng,二轮的相应的循环数可以减少;当投入量小于10 ng,一,二轮的相应的循环数要相应的增加

  1. 多重扩增引物纯化

一轮 PCR 产物 0.9×磁珠纯化

1) 准备工作:将 Hieff NGS® DNA Selection Beads 磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少 30 min。 配制 80%乙醇。

2) 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3) 吸取 27 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads(0.9×,Beads:DNA=0.9:1)至一轮 PCR 产物中,室温孵育 5 min。

4) 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约 5 min),小心移除上清。

5) 保持 PCR 管始终置于磁力架中,加入 200 μL 新鲜配制的 80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

6) 重复步骤 5,总计漂洗两次。

7) 保持 PCR 管始终置于磁力架中,开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂(不超过 5min)。

8) 直接加入 11 μL ddH2O,将 PCR 管从磁力架中取出,涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min。进入下一步反应。

二轮 PCR 产物 0.9×磁珠纯化

1) 准备工作:将 Hieff NGS® DNA Selection Beads 磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少 30 min。 配制 80%乙醇。

2) 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3) 吸取 27 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads(0.9×,Beads:DNA=0.9:1)至一轮 PCR 产物中,室温孵育 5 min。

4) 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约 5 min),小心移除上清。

5) 保持 PCR 管始终置于磁力架中,加入 200 μL 新鲜配制的 80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

6) 重复步骤 5,总计漂洗两次。

7) 磁珠晾干后,将PCR管从磁力架上取下,加入30 μL Nuclease-free ddH2O覆盖磁珠,使用移液器吹打混匀。室温孵育2 min。如果磁珠干燥开裂,适当延长孵育时间。

8)将PCR管短暂离心收集后置于磁力架中,分离磁珠和液体直到溶液澄清(约5 min)。 小心吸取25 μL上清转移至新的EP管中,继续进行下一步反应。

 


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