Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
Hieff NGS™ DNA分选磁珠
面议Hieff NGS® Ultima Pro PCR Free DNA Library Pr
¥2475Hieff NGSTM mRNA Isolation Master Kit
面议Recombinant APOBEC3A (A3A) Protein
¥1335Hieff NGS® G-Type In-Situ DNA Binding Profili
¥2855Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polym
¥3015E. coli DNA ligase (60 U/μL)
¥55Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for
¥3155伴刀豆球蛋白A磁珠
¥1255Oligo dT 磁珠
¥805文库构建专用接头试剂盒
¥515DNA文库接头专用配套试剂盒set2
¥8200本产品衔接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Yeasen: Cat#12309ES),替代其中的Frag/Prime buffer使用,用于RNA的片段化和一链cDNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA,也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12309ES中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA,没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free ddH2O中,可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。
产品信息
货号 | 13487ES08 / 13487ES24 / 13487ES96/13487ES98 |
规格 | 8 T / 24 T / 96 T/ 1000 T |
组分信息
组分编号 | 组分名称 | 13487ES08 | 13487ES24 | 13487ES96 | 13487ES98 |
13487-A | 4 × Frag/Prime Buffer | 32 μL | 96 μL | 384 μL | 4 mL |
储存条件
-25~-15℃保存,有效期1年。
使用说明
当Input RNA不需要片段化处理时,请选择方案A;当Input RNA需要片段化处理时,请选择方案B。
A1. 若Input RNA无需片段化处理,可结合Cat#12309ES试剂,按照表1直接配制第一链cDNA合成反应体系。
表1 直接进行第一链cDNA合成反应体系
名称 | 体积 (μL) |
Input RNA | 13 |
4×Frag/Prime Buffer | 4 |
Strand Specificity Reagent | 6 |
1st Strand Enzyme Mix | 2 |
Total | 25 |
A2. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309ES进行后续反应。
表2 第一链cDNA合成反应程序
温度 | 时间 |
热盖 105°C | On |
25 °C | 10 min |
42°C | 15 min |
70°C | 15 min |
4°C | Hold |
B1. 若Input RNA需要进行片段化处理,可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。
表3 片段化反应体系
名称 | 体积 (μL) |
Input RNA | 13 |
4×Frag/Prime Buffer | 4 |
Total | 17 |
B2. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,根据Input RNA的完整度和实验目的,参考Cat#12309ES说明书设置合适的片段化条件。
B3. 片段化产物进行一链cDNA合成,按照表4配制一链cDNA合成反应体系。
表4 第一链cDNA合成反应体系
名称 | 体积 (μL) |
Fragmented RNA | 17 |
Strand Specificity Reagent | 6 |
1st Strand Enzyme Mix | 2 |
Total | 25 |
B4. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309ES进行后续反应。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
4. Input RNA请溶于Nuclease free ddH2O,避免Mg2+的存在干扰片段化效果;Input RNA最大投入体积为13 μL,在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。