可溶性淀粉合成酶(SSS）测定试剂盒 微量法

测定意义：SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。

测定原理：SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。

需要的仪器，耗材:紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

可溶性淀粉合成酶(SSS）测定试剂盒 微量法

试剂一：液体×1 支，-20℃保存；临用前加入 250μL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂 4℃ 保存；试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 250μL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂 4℃ 保存；反应液Ⅰ的配制：临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支，依次把粉剂一、粉剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解。反应液Ⅱ的配制：临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支，依次把粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解。反应液Ⅲ的配制：临用前取液体三、粉剂八、粉剂九和粉剂十各一支，依次把粉剂八、粉剂九和粉剂十转移到液体三中混合溶解。

一、粗酶液制备按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。二、测定步骤 1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长 340nm，蒸馏水调零。 2、在 EP 管中按顺序加入下列试剂试剂名称（μL） 测定管样本 150 反应液Ⅰ 270 混匀，30℃保温 20 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却反应液Ⅱ 150 混匀，30℃保温 30 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g 25℃离心 10min，取上清液上清液 450 反应液Ⅲ 300 试剂一 10 试剂二 10 混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，计算ΔA=A2-A1。注意：反应液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。