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中文名称:Caspase 3 活性检测试剂盒
英文名称:Caspase 3 Activity Assay Kit
产品规格:20次|100次
发货周期:1~3天
本试剂盒是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中caspase 3酶活性或纯化的caspase 3酶活性的试剂盒。本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测时,除标准曲线外可以检测20个样品。 Caspase是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3也称CPP32、Yama或apopain,有时被写作caspase-3或caspase 3,属于caspase家族的CED-3亚家族(CED-3 subfamily),是细胞凋亡过程中的一个关键酶。Caspase 3是哺乳动物细胞中研究最多的一个caspase。Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9,并可以直接特异性剪切许多caspase底物,包括PARP(poly(ADP-ribose)polymerase),ICAD(Inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease),gelsolin和fodrin等。这些由caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。另外,caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用,包括染色质固缩(chromatin condensention),DNA片段化(DNA fragmentation)等。同时caspase 3对细胞起泡(cell blebbing)也起到关键作用。 本Caspase 3 活性检测试剂盒是基于caspase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)产生黄色的pNA(p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 3的活性。pNA在405nm附近有强吸收。 试剂盒中提供了caspase 3催化产生的黄色产物pNA,可以作为定量caspase 3酶活性的标准品。 |
试剂盒组分:
裂解液——————8ml
检测缓冲液——————8ml
Ac-DEVD-pNA(2mM)———200μl
pNA(10mM)——————200μl
储存条件:-20℃。
注意事项:
1、本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
3、禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并*清除残留清洁剂。
6、避免皮肤或粘膜与试剂接触。
7、需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融,否则将会增加空白吸收,从而影响检测结果。最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。
8、用培养基或 PBS 来配制待检测药物。如果待测药物有还原性,则测定不含细胞,仅含有 MTS 的待测药物溶液在 490 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小,则可以直接加入 MTS ,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基,并用新鲜培养基洗涤细胞两次,然后加入新的 100 μl 培养基和 10 μl MTS 进行检测。
9、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
10、加 MTS 溶液后孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,对于大多数情况孵育 1 小时即可,白细胞需要培养较长时间。
11、如果不是使用 96 孔板检测,MTS 溶液的用量相应等比例增加即可。
操作规程:
1、在96孔板加入细胞00μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入00微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入00微升5000~0000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~0μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及00%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 0%时的药物浓度(IC90)
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其他英文名称:Lectin from Phaseolus vulgaris (red kidney bean)
产品规格:BR,<62.5 μg/ml
包装:100毫克/500毫克
CAS号:9008-97-3
级别:BR
效价:<62.5 μg per mL agglutination activity;<10 μg/mL mitogenic activity
Agglutination titer:Agglutinates a 2% suspension of human erythrocytes
产品描述:Agglutination activity is expressed in mg/ml and is determined from serial dilutions of a 1 mg/ml solution. This activity is the lowest concentration to agglutinate a suspension of 2% human erythrocytes in phosphate buffered saline, pH 6.8, after 1 hr incubation at 25 °C. Mitogenic activity is determined by BrdU incorporation in HeLa cell cultures
性状:粉末
用途:生化研究。用于细胞体外培养;用于细胞功能及染色体的研究等。
保存:2~8°C