Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
DAPI 4’,6-联脒-2-苯基吲哚
面议Protein A/G Agarose Beads 蛋白A/G琼脂糖珠
面议Bovine Serum Albumin(BSA), DNase, Protease, IgG Fr
面议Anti-Flag亲和纯化凝胶
面议InStab™ Phosphatase Inhibitor Cocktail (100×,
面议HieffLongTaqDNAPolymerase长片段DNA聚合酶
面议Timentin(特美//汀)
面议dNTP Mix (10 mM each)
面议Peroxidase-Conjugated Goat Anti-Mouse IgM , µ
面议Bovine Serum Albumin(BSA), Fatty Acid Free 牛
面议GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂
面议琼脂糖树脂(GST标签蛋白纯化)
¥698产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) | *(元) |
Hygromycin B 潮霉素B | 60225ES03 | 1g | -20℃ | 719.00 | 419.00 |
Hygromycin B 潮霉素B | 60225ES10 | 10g | -20℃ | 5599.00 | 3999.00 |
产品描述
潮霉素B(Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。
大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),编码潮霉素B磷酸转移酶,将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到解毒作用。针对这一原理,潮霉素B是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外,由于作用模式的差异,常与G418 (GeneticinTM),Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂,因其选择性渗透进入因为病毒感染增强通透性的细胞,且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。
产品性质
CAS号(CAS NO.) | 31282-04-9 |
分子式(Formula) | C20H37N3O13 |
分子量(Molecular Weight) | 527.52 |
外观(Appearance) | 白色至淡黄色至褐色粉末 |
纯度(Purity) | >90% by HPLC |
溶解性(Solubility) | 易溶于水 |
活力(Potency) | ≥1050 U/mg |
结构式(Structure) |
运输和保存方法
冰袋运输。粉末-20℃干燥保存,2年有效。
使用方法
1. 储存液的配制(50mg/ml)
称取0.5g 潮霉素B加入10ml无菌去离子水内使其*溶解。先用5ml无菌去离子水预湿润0.22μm针头式过滤器,除尽水。之后使用此滤器过滤潮霉素B溶液,除菌后分装成单次使用的小量(如1ml)放到-20℃冻存,约1年稳定。
2. 常用筛选浓度
注意:潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于*次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
3. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素zui低浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) *天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
终浓度(μg/mL) | 培养基体积(ml) | 5mg/ml潮霉素B加入体积(ml) |
50 | 9.9 | 0.1 |
100 | 9.8 | 0.2 |
250 | 9.5 | 0.5 |
500 | 9.0 | 1.0 |
750 | 8.5 | 1.5 |
1000 | 8.0 | 2.0 |
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的zui低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
4. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,将细胞稀释至丰度不超过25%。
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
注意事项
1) 潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自E. Coli.之外,还发现于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。