一、深圳艾瑞斯生产的金霉素快速检测试剂盒概要金霉素是以四并苯为母核的一族抗生素，其中四环素、土霉素、金霉素及多西环素以其优良的抗菌性、稳定的药性及低廉的价格，在畜牧业生产中广泛用于疾病的治疗和预防及促进生长。但该类药物过量使用会导致畜产品中高浓度药物残留，直接影响消费者身体健康。高效液相色谱法目前是分析四环素类药物残留量的主要方法，但需要一系列繁琐的提取和净化处理步骤，而且存在回收率低，杂质干扰大等问题。本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、金霉素快速检测试剂盒原理

 金霉素检测试剂采用间接竞争ELISA方法检测组织、蜂蜜、鸡蛋等样本中的金霉素类药物，试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的金霉素类药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗金霉素类药物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含金霉素药物含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中金霉素类药物的残留量。

三、适用范围

  金霉素检测试剂盒可定量、定性检测组织、蜂蜜等样本中金霉素的药残留量。

四、技术指标

1 试剂盒灵敏度：0.05ppb(ng/ml)

2 反应模式：37℃，30min～30min～15min。

3 检测下限：

组织样本（鸡、鸭、猪肉/肝、虾、鱼、鸡蛋）：0.3ppb  蜂蜜样本：2ppb

4 交叉反应率：

 金霉素：100% 

5 样本回收率：

组织（鸡、鸭、猪肉/肝、虾、鱼）:85±20% 蜂     蜜：75±20%

五、试剂盒组成

酶标板、标准液（6个）、高标准液、酶标记物、抗体工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩洗涤液、复溶液

六、贮藏条件及保存期

储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。

保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。

酶联免疫试验步骤

    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

实验开始前需配制标准品应用液；低浓度的标准品不稳定，需现配现用。

在0ppb的瓶中加复溶液3ml，0.2ppb、0.6ppb、1.8ppb、5.4ppb的瓶中分别加复溶液2ml，16.2ppb的瓶中加复溶液3ml。

标准液6：取1.0ppm高浓度标准品溶液48.6ul加入装有3ml 复溶液16.2ppb的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为16.2ppb。

标准液5：取1ml标准液6加入装有2ml 复溶液5.4ppb的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为5.4ppb。

标准液4：取1ml标准液5加入装有2ml 复溶液1.8ppb的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为1.8ppb。

标准液3：取1ml标准液4加入装有2ml 复溶液0.6ppb的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为0.6ppb。

标准液2：取1ml标准液3加入装有2ml 复溶液0.2ppb的瓶中，盖紧，混匀，浓度即为0.2ppb。

标准液1：直接使用复溶液，浓度即为0ppb。

1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

2 加样反应：加标准品应用液或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗体工作液50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，37℃避光反应30min。

3 洗    涤：小心揭开盖板膜，甩去孔内液体，每孔加350ul工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。（用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

4 加酶反应：加酶标记物100µl/孔，37℃避光反应30min。

5 洗    涤：同上

6 显    色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，37℃避光显色15min（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。

7 终    止：加终止液50µl/孔，轻轻振荡混匀，终止反应。

8 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10min内完成。