1 β兴奋剂ELISA检测试剂盒原理及用途

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测尿样、组织、饲料等样本中的β-兴fen剂(beta-adrenergic,BAA)，试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的β-兴fen剂和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗β-兴fen剂抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含β-兴fen剂含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中β-兴fen剂的残留量。

2 β兴奋剂ELISA检测试剂盒技术指标

2.1 试剂盒灵敏度：0.1ppb(ng/ml)

2.2 反应模式：25℃，30min～15min

2.3 检测下限：

尿液……………………………0.1ppb

组织……………………………0.4ppb

饲料……………………………1ppb

2.4 交叉反应率：

盐酸克伦特罗…………………100%

沙丁胺醇………………………80%

 2.5 样本回收率：

尿样……………………………95%±10%

组织、饲料……………………85%±15%

3 试剂盒组成

酶标板……………………………96孔

标准液：各1ml

0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

高标准液（红盖）：100ppb…………1ml

酶标记物（红盖）……………………5.5ml

抗体工作液（蓝盖）…………………5.5ml

底物液A（白盖）……………………6ml

底物液B（黑盖）……………………6ml

终止液（黄盖）………………………6ml

20×浓缩洗涤液（白盖）……………40ml

10×复溶液(黄盖)……………………50ml

说明书…………………………………1份

盖板膜…………………………………1张

自封袋…………………………………1个

酶联免疫试验步骤

    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

2 加样反应：加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30分钟。

3 洗    涤：小心揭开盖板膜，甩去孔内液体，每孔加350ul工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干（用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

4 显    色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟。

5 终    止：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，终止反应。

6 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。