一、安定ELISA检测试剂盒概要

  安定作为一种镇静剂在畜牧业中的应用所导致的药物残留对人类健康危害严重,欧盟、美国、日本和我国等都禁止使用该药物。

二、安定检测试剂盒原理

   安定检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测组织（牛肉、鸡肉和猪肉）等样本中的安定药物（又名地xi泮，Diazepam，DZP），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样本溶液，样本中的安定药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗安定药物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含安定药物含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中安定药物的残留量。。

三、适用范围

   可定性、定量检测动物组织（鸡、猪、牛、水产等）以及饲料产品中安定的残留量。

四、技术指标

1 试剂盒灵敏度：0.3ppb(ng/ml)

2 反应模式：25℃，30min～30min～15min。

3 检测下限：

组织、肝脏：5ppb       饲料：50ppb  尿液：5ppb

4 交叉反应率：

地xi泮（安定）：100% 硝xi泮：<10% 奥沙xi泮：<10% 

5 样本回收率：

组织、肝脏：90±25% 

五、安定ELISA检测试剂盒组成

酶标板、标准液（6个）、高标准液、酶标记物、抗体工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩洗涤液、复溶液

六、贮藏条件及保存期

储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。

保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。 

 酶联免疫试验步骤

    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

2 加样反应：加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗体工作液50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光反应30分钟。

3 洗    涤：小心揭开盖板膜，甩去孔内液体，每孔加350ul工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干（用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

4 加酶反应：加酶标记物100µl/孔，25℃避光反应30分钟。

5 洗    涤：同上

6 显    色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。 

7 终    止：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，终止反应。

8 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。

结果分析

1 百分吸光率的计算

    标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

 百分吸光度值（%）＝A×100%

A0

A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值

2 标准曲线的绘制与计算

    以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。

    若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）

注意事项

1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3 混合要均匀，洗板要彻di，在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性。

4 在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。

5 不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。

7 反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。