一、己烯雌酚检测试剂盒概要

己烯雌酚（Diethylstilbestrol，DES）是甾类同化激素，被大量用于促进反刍动物的生长。但由于己烯雌酚存在明显的致癌性，欧美等发达国家已相继禁止或严格禁止使用。我国农业部第235号文件中规定，动物源性食品中己烯雌酚的残留xian量为不得检出。

二、己烯雌酚检测试剂盒原理

己烯雌酚试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测尿样、组织、饲料等样本中的己烯雌酚，试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的己烯雌酚和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗己烯雌酚抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含己烯雌酚含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中己烯雌酚的残留量。

三、适用范围

己烯雌酚试剂盒可定性、定量检测动物组织（肌肉、肝脏等）、尿液、饲料等样品中己烯雌酚的残留量。

四、 技术指标

1 试剂盒灵敏度：0.1ppb(ng/ml)

2 反应模式：37℃，30min～30min～15min。

3 检测下限：

组织（虾、鱼）：0.2ppb

猪肉/肝、鸡肉/肝：2ppb

饲料：……20ppb

尿液：……0.6ppb

4 交叉反应率：

己烯雌酚：100%

双烯雌酚：38.5%

己烷雌酚：8.5%

己炔雌二醇：<0.1%

雌三醇：…<0.1%

5 样本回收率：

尿     样   ： 70%±10%

组     织   ： 85%±10%

饲     料   ： 90%±10%

五试剂盒组成

酶标板、标准品、高标准品、酶标记物、抗体工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩洗涤液、复溶液

六、贮藏条件及保存期

储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。

保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。

 酶联免疫试验步骤

    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

2 加样反应：加标准品应用液或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗体工作液50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光反应30分钟。

3 洗    涤：小心揭开盖板膜，甩去孔内液体，每孔加350ul工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干（用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

4 加酶反应：加酶标记物100µl/孔，25℃避光反应30分钟。

5 洗    涤：同上

6 显    色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。 

7 终    止：加终止液50µl/孔，轻轻振荡混匀，终止反应。

8 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。

结果分析

1 百分吸光率的计算

    标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

 百分吸光度值（%）＝A×100%

A0

A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值

2 标准曲线的绘制与计算

    以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。