MGI平台双模式mRNA建库试剂盒

13330ES08MGI平台双模式mRNA建库试剂盒

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2022-03-21 16:01:09
541
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供货周期:现货;规格:8 T;货号:13330ES08;应用领域:医疗卫生,化工,生物产业;
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产品属性
供货周期
现货
规格
8 T
货号
13330ES08
应用领域
医疗卫生,化工,生物产业
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

MGI平台双模式mRNA建库试剂盒将cDNA二链合成与Endprep、dA-tailing进行合并,极大地缩减建库时间。二链合成模块配有两种buffer,客户可根据需要进行常规建库或链特异性建库。本产品适用于起始模板为10 ng-4 μg不同来源真核生物总RNA样本。经过mRNA分离、片段化、双链cDNA合成、末端修复、加A尾、接头连接和文库扩增,总RNA样品最终转化为适用于华大平台测序的文库。

详细介绍

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格/元

Hieff NGS® Ultima Dual-mode mRNA Library Prep Kit for MGI®

MGI平台双模式mRNA建库试剂盒

13330ES08

8 T

3975.00

13330ES24

24 T

10335.00

13330ES96

96 T

31375.00

产品描述

Hieff NGS® Ultima Dual-mode mRNA Library Prep Kit for MGI®是针对MGI®高通量测序平台专门研发的用于mRNA转录组文库构建试剂盒,本试剂盒cDNA二链合成Endprep、dA-tailing进行合并,极大地缩减建库时间。二链合成模块配有两种buffer,客户可根据需要进行常规建库或链特异性建库。本产品适用于起始模板为10 ng-4 μg不同来源真核生物总RNA样本。经过mRNA分离、片段化、双链cDNA合成、末端修复、加A尾、接头连接和文库扩增,总RNA样品最终转化为适用于华大平台测序的文库。

试剂盒包含个独立模块,BOX-I的核心为纯化mRNA所需的oligo(dT)磁珠。BOX-II包含mRNA段化试剂,反转录试剂,常规和链特异性dscDNA合成,以及后续建库所需的所有试剂。其中链特异性二链合成Buffer中将dTTP替换为dUTP,使cDNA第二链中掺入dUTP,而本试剂盒使用的高保真DNA聚合酶无法扩增含尿嘧啶的DNA模板,实现链特异性。提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

图片.png

运输与保存方法

冰袋运输。效期一年。存储温度如下,切不可搞错!

Box I:2-8保存Box II:-20保存

注意事项

一、 关于操作

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀,短暂离心后置于冰上待用。

3. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应,使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

4. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用ThermoFisher公司的RNAZapTM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

5. PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染,进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离;配备文库构建专用移液器等设备;定时对各实验区域进行清洁(推荐使用ThermoFisher公司的DNAZapTM高效核酸去除喷雾),以保证实验环境的洁净度。

6. 本产品仅做科研用途!

二、应用范围

本试剂盒适用于起始模板量为10 ng-4 μg(体积≤50 μL)的高质量动物、植物和真菌等真核生物的总RNA。如初始RNA浓度偏低,体积超过50 μL,可使用Hieff NGS® RNA Cleaner磁珠进行浓缩。RNA需通过Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico芯片检测,RIN值要求>7,以保证mRNA有完整的poly(A)尾结构。

本试剂盒的mRNA分离模块使用的是oligo (dT)磁珠,只有带poly(A)尾的mRNA才能被提取;其他不具poly(A)尾的RNA,如非编码RNA、无poly(A)尾的mRNA等不能适用本试剂盒。此外,FFPE样本中的mRNA降解严重,通常无完整的poly(A)尾结构,故亦无法使用本试剂盒进行建库。

本试剂盒所制备文库可进行多种RNA-Seq应用,包括:

基因表达(gene expression)

单核苷酸变异检测(single nucleotide variation discovery)

基因融合鉴定(gene fusion identification)

剪切变异体分析(splice variant analysis)

三、关于接头连接(Adapter Ligation)

1. 目前华大智造2种序号的接头:1-128和501-596。关于其使用要求,请详见华大智造“关于Adapter使用”有关说明或咨询本公司。此外,华大智造申明:2种接头由于设计工艺不同,禁止混用,否则测序数据无法拆分!

2. 我们建议选用高质量的商业化接头,如客户使用自制接头,请委托具有NGS引物合成经验的公司,并备注需进行严格的防污染控制。此外,进行接头退火操作时,请在超净台完成。每次只操作一种接头,防止交叉污染。

3. 建库过程中,接头浓度过高或过低都会导致建库成功率变低。本试剂盒操作方案中,所加入的接头体积固定为5 μL,请根据初始的RNA投入量,参考表1对接头进行稀释。接头稀释液请选择0.1×TE buffer,稀释过的接头可在4°C保存48小时。

1 Input Total RNA量与接头使用浓度推荐表

Input Total RNA

Adapter stock concentration

100–499 ng

2 μM

500–4000 ng

5 μM

*可根据不同类型Total RNA样本及投入量,按需求适当调整Adapter使用量

四、关于磁珠纯化与分选(Bead-based Clean Up and Size Selection)

1.建库过程中有多个步骤需要使用DNA纯化磁珠,我们推荐使用Hieff NGS® DNA Selection Beads (Yeasen Cat#12601)或AMPure® XP磁珠(Beckman Cat#A63880)进行DNA纯化和分选。

2.磁珠使用前应先平衡至室温,否则会导致得率下降、分选效果不佳。

3.磁珠每次使用前都应充分振荡混匀或使用移液器上下吹打充分混匀。

4.转移上清时,请勿吸取磁珠,即使微量残留都将影响后续文库质量。

5.磁珠洗涤使用的80%乙醇应现用现配,否则将影响回收效率。

6.产物洗脱前应将磁珠置于室温干燥。干燥不充分容易造成无水乙醇残留影响后续反应;过分干燥又会导致磁珠开裂进而降低纯化得率。通常情况下,室温干燥3-5 min足以让磁珠充分干燥。

7.DNA纯化或长度分选产物如需保存,可使用0.1×TE Buffer洗脱,产物于4°C可保存2天-20°C可保存1个月。

五、关于文库扩增(Library Amplification )

1. 本试剂盒中的文库扩增组分由本公司第二代高保真DNA聚合酶所组成,在第一代的基础上,大大增强了扩增的均一性,即使是低拷贝的基因,也能进行无偏好性地扩增。

2. 文库扩增步骤需要严格控制扩增循环数。循环数不足,将导致文库产量低;循环数过多,又将导致文库偏好性增加、重复度增加、嵌合产物增加、扩增突变积累等多种不良后果。表2列举了使用本试剂盒进行文库扩增,Input Total RNA量与相应扩增循环数的推荐。

2 Input Total RNA 量与扩增循环数推荐表*

Input Total RNA

Number of cycles

Non-stranded

Stranded

10 ng

15

15

100 ng

14

14

500 ng

12

13

1 μg

11

12

【注】:*由于文库产量不仅与投入量和扩增循环数相关,样本质量、片段化条件、分选条件等都会影响产量。建库过程中请根据实际情况综合考虑,选择最合适的建库条件。

使用方法

一、自备材料

1.纯化磁珠:Hieff NGS® DNA Selection Beads(Cat#12601)或AMPure XP Beads(Cat#A63880)或其他等效产品。

2.RNA质控:Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico Chip或其他等效产品。

3.Adapters:华大智造或本公司

4.文库质检:Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000 Chip/ High Sensitivity Chip或其他等效产品;文库定量试剂。

5.其他材料:无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

二、操作流程

图1. mRNA建库试剂盒操作流程.jpg

1. mRNA建库试剂盒操作流程

三、操作步骤

3.1 mRNA纯化和片段化mRNA Purification and Fragmentation)

1. 将mRNA Capture Beads从2-8取出,静置使其温度平衡至室温,约30 min。

2. 准备一个Nuclease free离心管,10 ng-4 μg总RNA,用Nuclease Free水将体积补至50 μL,冰上放置备用。

3. 颠倒或旋涡振荡混匀磁珠,吸取50 μL磁珠悬液加入至50 μL总RNA样品中,用移液器吹打6次,使其充分混匀。

4. 将磁珠与RNA的混合物置于PCR仪中,655 min;255 min;25hold,完成RNA与捕获磁珠的结合

5. 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,使mRNA与总RNA分离,小心移除上清。

6. 将样品从磁力架上取出,用200 μL Beads Wash Buffer重悬磁珠,移液器反复吹打6次以*混匀。将样品置于磁力架中,室温静置5 min,小心移除上清。

7. 重复步骤6,共洗涤两次。

8. 将样品从磁力架上取出,加入50 μL Tris Buffer重悬磁珠,用移液器反复吹打6次以*混匀。

9. 将样品置于PCR仪中,802 min;25hold,将mRNA洗脱下来。

10. 将样品从PCR仪中取出,加入50 μL Beads Binding Buffer,用移液器反复吹打6次以*混匀。

11. 室温放置5 min,使mRNA结合到磁珠上。

12. 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,小心移除上清。

13. 将样品从磁力架上取出,用200 μL Beads Wash Buffer重悬磁珠,移液器反复吹打6次以*混匀,将样品重新放回

至磁力架中,室温静置5 min,吸掉全部上清。

【注】:最后需要用10 μL移液器吸干净残留液体。

14. 将样品从磁力架上取出,用18.5 μL Frag/Prime Buffer重悬磁珠,用移液器吹打6次以*混匀;将样品置于PCR仪中(预设为94℃),可参考表3选择片段化程序,但不同物种片段化的效果有差异,客户可先根据自己的情况,做个片段化时间的梯度,比如94℃,5 min。使用Agilent 2100分析mRNA纯化产物大小

3 mRNA段化程序推荐

插入片段大小(bp)

打断程序

200-300

94°C10 min;

300-400

94°C7 min;

400-500

94°C5 min;

15. 片段化程序结束后,为防止poly(A)RNA与磁珠结合,请立即将样品置于磁力架中,待溶液澄清后,转移17 μL上清至一个新的Nuclease Free离心管中,立刻进入第一链合成反应Part 2-Step 1)

3.2 第一链cDNA的合成:

1. 将第一链合成试剂-20°C取出,颠倒混匀后瞬离。按表4所示,配制第一链cDNA合成的反应液

4 第一链cDNA合成反应体系

名称

体积(μL)

Fragmented mRNA

17

Strand Specificity Reagent

6

1st Strand Enzyme Mix

2

2. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

3. 将上述PCR管置于PCR仪中,按照表5所示设置反应程序,进行第一链cDNA的合成。反应结束后立即进行第二链cDNA的合成。

5 第一链cDNA合成反应程序

温度

时间

热盖 105°C

On

25°C

10 min

42°C

15 min

70°C

15 min

4°C

Hold

3.3第二链cDNA的合成/末端修复/加A

1. 将第二链合成试剂-20 °C取出,解冻后颠倒混匀;按照表6所示,配制第二链cDNA合成/末端修复/加A反应液。

6 第二链cDNA合成反应体系

名称

体积(μL)

1st Strand cDNA

25 μL

2nd Strand Buffer ( dNTP or dUTP)*

30 μL

2nd Strand Enzyme Master Mix

5 μL

【注】:*如构建普通mRNA文库,请使用含dNTP的buffer;如构建链特异性mRNA文库,请使用含dUTP的buffer。

2. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

3. 将上述PCR管置于PCR仪中,按照表7所示设置反应程序,进行第二链cDNA的合成。

7 第二链cDNA合成反应程序

温度

时间

热盖 105°C

on

16°C

30 min

72°C

15 min

4°C

Hold

3.4 接头连接(Adapter Ligation)

该步骤可在末端修复和dA尾添加的产物末端,连接特定的MGI®接头。

1. 参考注意事项三中的表1,根据Input RNA量,稀释Adapter至合适浓度。

2. 将表8中各试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用。

3. 于3.3步骤结束后的PCR管中继续配制表8所示反应体系。

8 Adapter Ligation体系

名称

体积(μL)

dA-tailed DNA

60

Ligation Enhancer

30*

Novel T4 DNA Ligase

5

DNA Adapter

5**

Total

100

【注】:*Ligation Enhancer使用前请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时离心后使用。

**本公司接头原始浓度为10 μM, 请根据注意事项1的提示,根据投入量对接头进行稀释,使接头添加体积固定为5 μL

4. 使用移液器轻轻吹打混匀,并短暂离心将反应液收集至管底。

5. 将PCR管置于PCR仪中,设置表9所示反应程序,进行接头连接反应:

9 Adapter Ligation反应程序

温度

时间

热盖

Off

20°C

15 min

4°C

Hold

3.5连接产物纯化(Post Ligation Clean Up)

本方案适用于片段<200 bp时,通过两次纯化去除体系中的接头残留;当插入片段≥200 bp时,参照附录二的分选方案,通过纯化、分选获得目标长度的文库

适用于插入片段<200 bp的文库(需进行两轮纯化)

1. 准备工作:将Hieff NGS® DNA Selection Beads磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3. 吸取60 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads(0.6×,Beads:DNA=0.6:1)至Adapter Ligation产物中,涡旋或吹打混匀,室温孵育5 min。

4. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约5 min),小心移除上清。

5. 保持PCR管始终置于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec后,小心移除上清。

6. 重复步骤5,总计漂洗两次。

7. 保持PCR管始终置于磁力架中,开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂(不超过5 min)。

8. PCR管从磁力架中取出,加入52 μL ddH2O,涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置5 min。将PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约3 min),小心移取50 μL上清至新PCR管中,再进行一轮纯化

9. 吸取40 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads(0.8×,Beads:DNA=0.8:1)至上一步产物中,涡旋或吹打混匀,室温孵育5 min。

10. PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约3 min),小心移除上清。

11. 保持PCR管始终置于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec后,小心移除上清。

12. 重复步骤11,总计漂洗两次。

13. 保持PCR管始终置于磁力架中,开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂(不超过5 min)。

14. PCR管从磁力架中取出,加入21 μL ddH2O,涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置5 min。将PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约3 min),小心移取20 μL上清至新PCR管中,进行PCR扩增。

3.6 文库扩增(Library Amplification)

该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集。

该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集。

1. 将表10中的试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用

2. 于无菌PCR管中配制表10所示反应体系。

10  接头连接产物PCR反应体系

组分名称

体积(μL)

2×Super Canace® II High-Fidelity Mix

25

Primer Mix for MGI®

5

Adapter Ligated DNA

20

                       

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底。

4. 将PCR管置于PCR仪中,设置表11示反应程序,进行PCR扩增

11  PCR扩增反应程序

温度

时间

循环数

98°C

1 min

1

98°C

10 sec

11~15cycles*

60°C

30 sec

72°C

30 sec

72°C

5 min

1

4°C

Hold

-

*文库扩增循环数需根据样本质量、投入量等建库条件进行调整,详见注意事项五。

3.7 扩增产物磁珠纯化Post Amplification Clean Up)

1. 准备工作:将Hieff NGS® DNA Selection Beads磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3. 吸取45 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads(0.9×,Beads:DNA=0.9:1)至Adapter Ligation产物中,涡旋或吹打混匀,室温孵育5 min。

4. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约5 min),小心移除上清。

5. 保持PCR管始终置于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec后,小心移除上清。

6. 重复步骤5,总计漂洗两次。

7. 保持PCR管始终置于磁力架中,开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂(不超过5 min)。

8. PCR管从磁力架中取出,加入21 μL ddH2O,涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置5 min。将PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约3 min),小心移取20 μL上清至新PCR管中,进行文库定量、质检

3.8 文库质量控制

通常情况下,构建好的文库可通过浓度检测和长度分布检测来进行质量评价,具体请参见注意事项

附录一:mRNA段化效果展示

图2. mRNA不同打断时间对应的RN<span class=

2. mRNA不同打断时间对应的RNA段范围。分别以94°C,10 min、94°C,7min和94℃,5 min处理。打断后mRNA进行进行2.2X 磁珠纯化,通过Agilent 2100 Bioanalyzer进行检测。

【注】:本结果使用的RNA是Agilent公司的Universal Human Reference RNA,若使用其他来源的RNA,最好优化打断时间

附录分选条件说明

分选方案适用于94°C10 min、94°C7min和94℃,5 min片段化的RNA建库,可以获得插入片段大于200bp的文库:

方案一:接头连接产物纯化后分选

★ 0.6× Hieff NGS® DNA Selection Beads接头连接产物的纯化

1. 准备工作:将Hieff NGS® DNA Selection Beads磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3. 吸取60 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads(0.6×,Beads:DNA=0.6:1)至Adapter Ligation产物中,涡旋或吹打混匀,室温孵育5 min。

4. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约5 min),小心移除上清。

5. 保持PCR管始终置于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec后,小心移除上清。

6. 重复步骤5,总计漂洗两次。

7. 保持PCR管始终置于磁力架中,开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂(不超过5 min)。

8. 将PCR管从磁力架中取出,加入102 μL ddH2O,涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置5 min。将PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约5 min),小心移取100 μL上清至新PCR管中,准备进行双轮分选。

双轮分选(以94°C,7min打断,分选文库大小为380bp~480bp为例说明,其他文库大小按推荐比例进行磁珠分选)

1. 请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。

2. 根据DNA段长度要求,参考表12,在上述100 μL DNA中加入第一轮分选磁65 μL(0.65×,涡旋或移液器吹打10次混匀。

3. 室温孵育5 min。

4. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约5 min),小心转移上清到干净的离心管中,残留1-2 μL溶液管底。

5. 参考表12向上清中加入第二轮分选磁珠15 μL(0.15×

6. 涡旋混匀或移液器吹打10次混匀,室温静置5 min。

7. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约3 min),小心移除上清。

8. 保持PCR管始终处于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec,小心移除上清。

9. 重复步骤8。

10. 保持PCR管始终处于磁力架中,开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂(3 min)。

11. 将PCR管从磁力架中取出,加入21 μL ddH2O,涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀,室温静置5 min。

12. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后(约3 min),小心转移20 μL上清至干净管中。

12 短接头文库分选推荐磁珠比例

插入片段长度(bp)

200~300

300~400

400~500

500~600

文库长度(bp)

280~380

380~480

480~580

580~680

打断条件

94℃ 10min

94℃ 7min

94℃ 7min

94℃ 5min

第一轮磁珠体积(ul)

70(0.7×

65(0.65×

58(0.58×

50(0.5×

第二轮磁珠体积 (ul)

20(0.2×

15(0.15×

15(0.15×

15(0.15×

【注】:此表推荐的双轮分选比例适用于Hieff NGS® DNA Selection Beads;表中“×”表示样品DNA体积。如所需文库插入片段主峰为300 bp时,若在短接头连接之后分选,样品DNA体积为100 μL,则第一轮分选磁珠使用体积为0.65×100 μL=65 μL第二轮分选磁珠使用体积0.15×100 μL=15 μL

图3. 1ug 293 total RNA,在94°C,10 min、94°C,7min和94℃,5 min片段化后,根据表12推荐的磁珠比例得到的文库大小。.jpg

3. 1ug 293 total RNA,在94°C,10 min、94°C,7min和94℃,5 min片段化后,根据表12推荐的磁珠比例得到的文库大小。

方案二:接头连接产物直接分选(以94°C,7min打断,分选文库大小为410bp~510bp为例说明,其他文库大小按推荐比例进行磁珠分选)

500 ng以的总RNAmRNA抓取后建库,推荐直接分选,体系比较粘稠,需要小心添加,RNA质量略差样本可能会有接头残留。

1. 请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。

2. 根据DNA段长度要求,参考表13,在上述100 μLDNA连接体系中加入第一轮分选磁20 μL(0.20×,涡旋或移液器吹打10次混匀。室温孵育10 min。

3. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约5 min),小心转移 100 μL上清到干净的离心管中,。

4. 参考表13向上清中加入第二轮分选磁珠10 μL(0.10×

5. 涡旋混匀或移液器吹打10次混匀,室温静置10 min。

6. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约3 min),小心移除上清。

7. 保持PCR管始终处于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec,小心移除上清。

8. 重复步骤7

9. 保持PCR管始终处于磁力架中,开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂(3 min)。

10. 将PCR管从磁力架中取出,加入21 μL ddH2O,涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀,室温静置5 min。

11. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后(约3 min),小心转移20 μL上清至干净管中。

13 短接头文库分选推荐磁珠比例

插入片段长度(bp)

200~300

300~400

400~500

500~600

文库长度(bp)

280~380

380~480

480~580

580~680

打断条件

94℃ 10min

94℃ 7min

94℃ 7min

94℃ 5min

第一轮磁珠体积(μL)

25(0.25×

20(0.2×

15(0.15×

15(0.15×

第二轮磁珠体积 (μL)

10(0.1×

10(0.1×

10(0.1×

10(0.1×

【注】:此表推荐的双轮分选比例适用于Hieff NGS® DNA Selection Beads;表中“×”表示样品DNA体积。如所需文库插入片段主峰为300 bp时,若在短接头连接之后分选,样品DNA体积为100 μL,则第一轮分选磁珠使用体积为0.20×100 μL=20 μL第二轮分选磁珠使用体积为0.1×100 μL=10 μL

HB211122


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