Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
Hieff NGS™ DNA分选磁珠
面议Hieff NGS® Ultima Pro PCR Free DNA Library Pr
¥2475Hieff NGSTM mRNA Isolation Master Kit
面议phi29 DNA Polymerase (10 U/μL)
¥585Recombinant Ten-Eleven Translocase
¥1555Recombinant Ten-Eleven Translocase (TET)14
¥1555Recombinant APOBEC3A (A3A) Protein
¥13354×Multiplex PCR Master Mix for Pathogen
¥725Hieff NGS® G-Type In-Situ DNA Binding Profili
¥2855Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polym
¥3015E. coli DNA ligase (60 U/μL)
¥554× Frag/Prime Buffer
¥102产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
UCF.ME®T7 RNA Polymerase GMP-grade(50 U/μL) | 10624ES86 | 2500 U | 2655 |
10624ES90 | 5000 U | 4855 | |
10624ES96 | 25000 U | 20155 | |
10624ES97 | 50000 U | 36255 |
产品描述
本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶,以含有T7启动子序列(5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’)的双链DNA为模板,以NTP为底物,合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板,因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。
注:G*为RNA转录的第一个碱基。
本品是按照GMP工艺要求生产,产品以无菌液体形式提供。
产品性质
来源(Source) | 重组E. coli |
最适温度(Optimum Temperature) | 37℃ |
宿主核酸残留(Host nucleic acid residue) | <10 fg/U |
宿主蛋白残留(Host protein residue) | <50 ppm |
病原体(HBV/ HCV/HIV)检测 | 无检出 |
RNA酶残留(RNase residue) | 阴性 |
内毒素残留(Endotoxin residue) | <10 EU/mg |
支原体检测(Mycoplasma detection) | 无检出 |
无菌检测(Sterility testing) | 无检出 |
储存缓冲液(Storage Buffer) | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100,50%(v/v)甘油,pH7.9@25℃ |
活性单位定义(Unit Definition) | 在37℃、pH 8.0的条件下,1 h内使 1 nmol 的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。 |
注:具体产品质检数据及更多指标请查看批次质检报告
产品组分
注:10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2和100 mM DTT,但不含有NTP,如需请购买本公司NTP set solution 10133。
产品应用
1. 单链 RNA合成(包括mRNA,siRNA,gRNA等各类RNA前体,以及同位素标记或非同位素标记的RNA探针)
2. 以(Cap analog)为引物合成Capped mRNA
运输和保存方法
干冰运输。-20℃保存,有效期一年。
应用实例
1、按下列体系配制反应体系
【注】:
① DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亚精胺,亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。
② Buffer和水建议放置到室温,然后开始使用,反应于室温下配制,防止温度低引起亚精胺沉淀高浓度DNA模板。
③ 若转录长度< 100 nt,模板投入量可增加至2 μg。
④ RNase inhibitor (40 U/μL)请购买本公司产品10603。
⑤ 为了特定区域的有效转录,建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。
2、37℃反应1-2 h(若转录长度≤ 100 nt,增加时间至4-8 h)。
3、反应结束后,使用2 U DNaseⅠ(无RNase)37℃、15 min去除DNA模板。
4、转录产物纯化:体外转录产物可选用RNA Cleaner磁珠进行纯化(12602),以去除蛋白、盐离子和其他杂质。也可以采用酚/氯仿纯化法(具体操作步骤可联系Yeasen索取)。
注意事项
1、DNA模板的种类:推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。
2、转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板;PCR产物建议采用胶回收纯化后使用。
3、在20 μL反应体系中加入0.02 U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
HB211025