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上海市所在地
DNA提取流程图:
下列是产品的订购信息!产品仅用于科研
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
DNA Marker(100bp~2kb) | 50次(300μ)|200次(4×300μl) | GOY-F10125 |
产品详细介绍:
本制品是由单独制备的PCR产物混合而成,共有6条DNA片段,已加入上样缓冲液,可直接电泳,每次上样6μl,为便于电泳后观察,750bp条带亮,每次用量约为100ng,其它条带的DNA每次用量约为50ng。本制品浓度约为50μgDNA/ml。 条带图:6μl加样,凝胶长度10cm,电压6V/cm,0.5×TBE Buffer 贮存液组成:10mM Tris-HCl(pH8.4),10mM EDTA,0.02%溴酚兰,5%甘油 储存条件:-20℃可保存一年以上,4℃保存三个月。 使用方法: 1.取3-6μl本产品加入琼脂糖凝胶的加样孔中(每1mm点样孔宽度加1μl,如果加样孔较宽,可适当增加上样量),进行电泳。 2.建议电泳条件为1.0-2.5%琼脂糖凝胶,正负极之间电压4-10V/cm。 3.通过EB染色,在紫外灯下观察电泳条带。 注意事项: 1.本产品可直接使用,不要加热。 2.及时更换电泳缓冲液并使用新制的凝胶,以免影响电泳结果。 |
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物*分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
兔子雌二(E2)ELISA试剂盒 6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose 中文名:6-O-对羟基苯甲酰葡萄糖 分子式:C13H16O8 度:98.0%
兔子雌二(E2)ELISAKit 6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose 202337-44-8 中文名:6-O-对羟基苯甲酰葡萄糖 分子式:C13H16O8
兔子肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒 6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose 中文名:6-O-对羟基苯甲酰葡萄糖 分子式:C13H16O8
兔子肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISAKit 6-Hydroxystigmasta-4,22-dien-3-one 中文名: 分子式:C29H46O2 度:%
兔子层连蛋白elisa试剂盒 兔子层连蛋白试剂盒 规格型号:96T/48T 兔子层连蛋白试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:兔子层连蛋白试剂盒、兔子层连蛋白elisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 5-Hydroxymethylfurfural 67-47-0 中文名:5-羟甲基糠醛 分子式:C6H6O3
1,2,3,4-四氢萘(THN)(Standard for GC, ≥99.5% (GC)) 1,2,3,4-Tetrahydronaphthalene 质量规格:Standard for GC, ≥99.5% (GC) ELISAKitLipase人脂肪酶规格:48T/96T
三乙酯(TEP)(Standard for GC,>99.7%(GC)) Triethyl phosphate 质量规格:Standard for GC,>99.7%(GC) 小鼠0脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒 ,英文名: PL-A2 ELISA Kit
十三烷(Standard for GC,>99%(GC)) Tridecane 质量规格:Standard for GC,>99%(GC) 大鼠雌二受体(ER)ELISA检测试剂盒ratEsadiolreceptor,ERELISAKit 96T/48T
十四(Standard for GC, ≥99.5% (GC)) 1-Tetradecanol 质量规格:Standard for GC, ≥99.5% (GC) 人调宁蛋白-1(CNN1)试剂盒 Human Calponin-1,CNN1 ELISA Kit
十一烷(standard for GC,≥99.5%(GC)) Undecane 质量规格:standard for GC,≥99.5%(GC) RatN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit大鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯(AcSDKP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
十一酸(Standard for GC,≥99.0%(GC)) Undecanoic acid 质量规格:Standard for GC,≥99.0%(GC) D-苹果酸待测样品处理试剂盒20
甲基壬基甲酮(Standard for GC,≥99.5%(GC)) 2-Undecanone 质量规格:Standard for GC,≥99.5%(GC) MouseproteinkinaseB,PKBELISA试剂盒小鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA试剂盒规格:96T/48T
顺式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯(标准品) cis-4,7,10,13,16,19-Docosahexaenoic acid methyl ester 质量规格:分析标准品 小鼠0脂酶A2(PL-A2)ELISA 试剂盒
顺式-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(标准品) cis-5,8,11,14,17-Eicosapentaenoic acid 质量规格:分析标准品 The rat cellar protein Caveolin1 (Cav-1) ELISA Kit 大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA试剂盒
Celite 硅藻土 545(助滤剂,碳酸钠处理,通量煅烧) Celite 545 质量规格:助滤剂,碳酸钠处理,通量煅烧 HumanElastinELISAKit 人弹性蛋白(Elastin)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
DNA Ladder(100~2000bp)组织ZAP70激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)
细胞ZAP70激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)
组织YES激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)
细胞YES激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)
组织VEGFR2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)
实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)