R&D/美国 品牌
经销商厂商性质
上海市所在地
DNA提取流程图:
下列是产品的订购信息!产品仅用于科研
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
DNA Ladder J (150~1500bp) | 50次|250次 | GOY-F10133 |
产品详细介绍:
储存条件:冷冻(-20℃) 技术规格 Band 150,250,350,450,550,650,750,850,1000,1500 bp; Storage Buffer 10mMTris-HCl(pH 7.6),10mMEDTA,0.033%bromophenol blue,0.008%xylene cyanoland 10%glycerol. |
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物*分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
兔子S100B蛋白(S-100B)ELISAKit 6-Aminoindole 5318-27-4 中文名:6-氨基吲哚 分子式:C8H8N2 度:98.0%
兔子E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISAKit 6-Aminoindazole 6967-12-0 中文名:6-氨基吲唑 分子式:C7H7N3 度:98.0%
兔子D二聚体(D2D)ELISA试剂盒 6-Amino-4-hydroxy-2-naphthalenesulfonic acid 90-51-7 中文名:6-氨基-4-羟基-2-萘磺酸 分子式:C10H9NO4S 度:98.0%
兔子C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒 6-Amino-4-hydroxy-2-naphthalenesulfonic acid 90-51-7 中文名:6-氨基-4-羟基-2-萘磺酸 分子式:C10H9NO4S
兔子C反应蛋白(CRP)ELISAKit 9,9-Bis(4-amino-3-methylphenyl)fluorene 107934-60-1 中文名:9,9-双(4-氨基-3-甲)芴 分子式:C27H24N2
1-(三氟乙酰)咪唑(用于GC衍生化,≥98.5%) 1-(Trifluoroacetyl)imidazole 质量规格:用于GC衍生化,≥98.5% 大鼠内皮素1(ET-1)ELISA检测试剂盒ratEndothelin1,ET-1ELISAKit 96T/48T
2,3-二丙酰胺(98%) 2,3-Dibromopropionamide 质量规格:0.98 人电子转移黄素蛋白β肽(ETFB)试剂盒 Human ETFB ELISA Kit
(800目) Talc 质量规格:800目 RatneuropeptideY,NP-YELISAKit大鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒规格:96T/48T
(药用级,325目) Talc 质量规格:药用级,325目 EDTA三血液抗凝液100毫升
硼砂pH标准物质(硼砂PH(25℃):9.18) pH standard-Borax 质量规格:硼砂PH(25℃):9.18 Mousepyruvatedehydrogenase-E1,PDHE1ELISA试剂盒小鼠同酸脱氢酶E1(PDHE1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
3-苯氧苄(98%) 3-Phenoxybenzyl alcohol 质量规格:0.98 小鼠0酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA 试剂盒
果胶(半乳糖醛酸(干基计)≥74.0 %) Pectin 质量规格:半乳糖醛酸(干基计)≥74.0 % Rat connective tissue growth factor (CTGF) ELISA Kit 大鼠结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒
三丁酯(AR,99%) Tributyl phosphate 质量规格:AR,99% Humanα-sarcomericactin,α-SCAELISAKit 人α横纹肌肌动蛋白(α-SCA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
三丁酯(CP) Tributyl phosphate 质量规格:CP HumanAdenovirusAigen,ADV-AgELISA试剂盒人腺病毒抗原(ADV-Ag)ELISA试剂盒规格:96T/48T
三丁酯(标准品) Tributyl phosphate 质量规格:分析标准品 直接细胞克隆两步法逆转录PCR试剂盒100
DNA Marker J(150~1500bp)组织LYNA激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)
细胞LYNA激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)
组织LCK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)
细胞LCK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)
组织JAK3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)
实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)