SP6体外转录试剂盒
SP6体外转录试剂盒
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SP6体外转录试剂盒

50次SP6体外转录试剂盒

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2022-04-22 14:31:08
222
属性:
供货周期:现货;货号:GOY-F10294;应用领域:化工;主要用途:仅供科研使用;
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产品属性
供货周期
现货
货号
GOY-F10294
应用领域
化工
主要用途
仅供科研使用
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上海谷研实业有限公司

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产品简介

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详细介绍

DNA提取流程图:

QQ截图20220414142532.png

下列是产品的订购信息!产品仅用于科研

中文名称

英文名称

产品规格

货号

SP6体外转录试剂盒

SP6 in vitro   Transcription Kit

50

GOY-F10294

产品详细介绍:

本试剂盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒,它利用含有SP6启动子的模版DNA,以NTP为底物,从SP6启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA,简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点:

即开即用,用户只需提供含SP6启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验,不需要单独准备每一个成份。

单溶液预配液,减少加样次数,避免了操作误差,增加了可重复性。

模版DNA可以是线性化的质粒DNA,也可以是PCR扩增产物。

可以合成的RNA的佳长度在20nt2000nt之间。

产品配方经过精心优化,每μg DNA模版可以合成26μg RNA

得到的RNA可以用于RNA结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

保存:-20℃,有效期一年。

 

操作步骤:
1.
匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅
b.
单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(3.5cm直径的培养板)1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNADNA污染。
c
.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2
.将匀浆样品在室温(15-30)放置5分钟,使核酸蛋白复合物*分离。
3
.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-810000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5.
每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8
10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅
7.
把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙,室温放置10分钟。
8. 2-8
10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
柠檬酸(CA)含量测试盒   可见分光光度法   50/48              Rizatriptan benzoate  145202-66-0  中文名:苯甲酸利扎曲坦  分子式:C22H25N5O2 

镍快速测试盒   Nickel rapid test case  Ranitidine  66357-35-5  中文名:  分子式:C13H22N4O3S  度:98.0%  关键词: 

镍测试盒   Nickel test case  4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester  中文名:  分子式:C16H16N4O3  度:98.0%

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4-氨基-5-咪唑甲酰胺  5-Amino-4-imidazolecarboxamide  质量规格:>98%(滴定) 人脂0壁酸(LTA)ELISA检测试剂盒Humanlipoteichoicacids,LTAELISAKit 96T/48T

TNP 470/O-(氯乙酰氨甲酰基)烟曲   AGM-1470   质量规格:≥97% 大鼠细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)试剂盒 Rat suppressors of cytokine signaling 3,SOCS-3 ELISA Kit

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SP6
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实验步骤
(1)
实验开始前将RNA提取液于65水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL80ul,50mL中加入300ul)
(2)
取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65
水浴3-10 min,期间混匀2-3
(4)
加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(5)
取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(6)
加入1/4V体积10M LiCl溶液,4放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4
离心20min
(8)
弃上清,500ul SSTE溶解沉淀
(9)
::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1(10,000rpm,4,5min)
(10)
2V体积的无水乙,-70冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4
离心20 min
(12)
弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)
200ulDEPC处理水溶解
(14)
用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(
在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)


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