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DNA提取流程图:
下列是产品的订购信息!产品仅用于科研
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
SP6 in vitro Transcription Kit | 50次 | GOY-F10294 |
产品详细介绍:
本试剂盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒,它利用含有SP6启动子的模版DNA,以NTP为底物,从SP6启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA,简单快速获得大量的RNA分子。 产品特点: 即开即用,用户只需提供含SP6启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验,不需要单独准备每一个成份。 单溶液预配液,减少加样次数,避免了操作误差,增加了可重复性。 模版DNA可以是线性化的质粒DNA,也可以是PCR扩增产物。 可以合成的RNA的佳长度在20nt到2000nt之间。 产品配方经过精心优化,每μg DNA模版可以合成2~6μg RNA。 得到的RNA可以用于RNA结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。 保存:-20℃,有效期一年。 |
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物*分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
柠檬酸(CA)含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 Rizatriptan benzoate 145202-66-0 中文名:苯甲酸利扎曲坦 分子式:C22H25N5O2
镍快速测试盒 Nickel rapid test case Ranitidine 66357-35-5 中文名: 分子式:C13H22N4O3S 度:98.0% 关键词:
镍测试盒 Nickel test case 4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester 中文名: 分子式:C16H16N4O3 度:98.0%
尿酸含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 Tropisetron 105826-92-4 中文名:盐酸托烷司琼 分子式:C17H21ClN2O2
尿激酶型纤溶酶原激活因子受体 (uPA-R) 作用: ELISA 规格: 48T/96T 进口分装 O-Benzyl-L-tyrosine 16652-64-5 中文名:O-苄基-L-酪 分子式:C16H17NO3
戴斯-马丁氧化剂 Dess-Martin periodinane 质量规格:>95% HumanVascularEndothelialcellGrowthFactorD,VEGF-DELISAKit人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)ELISA试剂盒规格:96T/48T
西多福韦 Cidofovir 质量规格:>98%,BR,可用于细胞培养 小鼠基质金属蛋白酶12(MMP12)ELISA试剂盒 ,英文名: MMP12 ELISA Kit
4-氨基-5-咪唑甲酰胺 5-Amino-4-imidazolecarboxamide 质量规格:>98%(滴定) 人脂0壁酸(LTA)ELISA检测试剂盒Humanlipoteichoicacids,LTAELISAKit 96T/48T
TNP 470/O-(氯乙酰氨甲酰基)烟曲 AGM-1470 质量规格:≥97% 大鼠细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)试剂盒 Rat suppressors of cytokine signaling 3,SOCS-3 ELISA Kit
牛磺石胆酸钠(进分) taurolithocholate 质量规格:≥97%进口分装 英文名称RatAndrostenedioneELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)规格:96T/48T
甘氨鹅脱氧胆酸 glycochenodeoxycholic acid (GCDCA) 质量规格:>97% 果菜纤维素酶解法定量检测试剂盒10
牛磺猪去氧胆酸钠 taurohyodeoxycholate hydrate 质量规格:≥98%,美国进口 ELISAKitPDGF-AB人血血小板衍生生长因子AB规格:48T/96T
磺丁基-β-环糊精;磺丁基醚倍他环糊精钠 Captisol( beta-Cyclodextrin, sulfobutyl ethers, salts) 质量规格:>99%,USP 小鼠基质金属蛋白酶10(MMP10)ELISA试剂盒 ,英文名: MMP10 ELISA Kit
缬氨 Valinomycin 质量规格:>95% (HPLC),进分 人游离原卟啉(FEP)ELISA检测试剂盒HumanFreeerythrocyteproloporphyrin,FEPELISAKit 96T/48T
5-氯-1,3-二甲基吡唑 5-Chloro-1,3-dimethyl-1H-pyrazole 质量规格:>98%, 大鼠细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)试剂盒 Rat suppressors of cytokine signaling 1,SOCS-1 ELISA Kit
SP6体外转录试剂盒细胞半胱-8(CASPASE-8)活性比色法定量检测试剂盒
组织半胱-7(CASPASE-7)活性荧光定量检测试剂盒
细胞半胱-7(CASPASE-7)活性荧光定量检测试剂盒
组织半胱-7(CASPASE-7)活性比色法定量检测试剂盒
细胞半胱-7(CASPASE-7)活性比色法定量检测试剂盒
实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)