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中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
MMLV cDNA Synthesis Kit | 100次 | GOY-F10306 |
产品详细介绍:
本试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。本产品包含从RNA模板逆转录成cDNA第一链所需的所有试剂,其中包括MMLV逆转录酶、反应缓冲液、引物、dNTP等。经过突变改造的MMLV逆转录酶RNase H活性缺失,减少了逆转录反应中RNA的降解,更容易获得全长的cDNA。MMLV逆转录酶热稳定性强,可得高产量的cDNA,使用简单方便。本系统对后续的PCR以及定量PCR试验兼容性高,适用各种PCR反应的DNA聚合酶。 产品特点: RNase H-:经突变的MMLV逆转录酶,RNase H活性缺失,更易获得全长cDNA。 使用方便:试剂盒包含除RNA模板外的逆转录所需全部试剂。 保存:-20℃ |
DNA提取流程图:
图
实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物*分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
快速真菌 50T 3-O-Methyl-Estrone 中文名:3-氧甲基基雌酮 分子式:C19H24O2 度:98.0%
快速H-E组织细胞及脱落细胞染液 Phosphate buffer 3-Amino-3-phenyl-1-propanol 中文名:3-氨基-3--1-丙 分子式:C9H13NO
跨膜蛋白100 英文名称: Human ansmembrane protein 100 规格: 48T/96T 英文缩写: TMEM100 Ritonavir 中文名: 分子式:C37H48N6O5S2
口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T Phenformin 中文名:盐酸苯乙双胍 分子式:C10H16ClN5
口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸检测试剂盒(-PCR法) 48T Phenformin 834-28-6 中文名:盐酸苯乙双胍 分子式:C10H16ClN5 度:98.0%
A66,p110α抑制剂 A66 质量规格:>98%,BR ELISAKitPGF人血小板生长因子规格:48T/96T
SC-514;IKK-2抑制剂 SC514 质量规格:>98%,BR 小鼠肌酸激酶(CK)ELISA试剂盒 ,英文名: CK ELISA Kit
γ-环糊精 γ-Cyclodextrin 质量规格:>98%,BR 大鼠Ⅹ(FⅩ)ELISA检测试剂盒RatcoagulationfactorⅩ,FⅩELISAKit 96T/48T
甲基倍他环糊精,2,6-二甲基-β-环糊精 Me-β-CD 质量规格:>98%,BR 人不对称二甲基精(ADMA)试剂盒 Human asymmeical dimethylarginine,ADMA ELISA Kit
埃博B;帕土匹龙 Epothilone B(EPO906, Patupilone) 质量规格:>98%,BR RatThyroglobulin,TGELISAKit大鼠甲状腺球蛋白(TG)ELISA试剂盒规格:96T/48T
BMS-345541 BMS345541 质量规格:>98%,BR L-谷氨酰-α-萘酰胺(L-Glamyl-α-naphthylamide)1克
IKK-16,选择性IKK抑制剂 IKK16 质量规格:>98%,BR PorcineAngiopoietin1,ANG-1ELISA试剂盒猪血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
曲格列汀琥珀酸盐 Trelagliptin succinate;SYR-472 质量规格:>98%,BR 小鼠肌生成抑制素(MSTN)ELISA试剂盒 ,英文名: MSTN ELISA Kit
2-[2-(2-t-Boc-氨基乙氧基)乙氧基]乙 2-[2-(2-t-Boc-aminoethoxy)ethoxy]ethanol 质量规格:美国进口原装 大鼠IX(FIX)ELISA检测试剂盒RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKit 96T/48T
2'-脱氧-2',2'-二氟核苷 2’,2’-Difluoro-2’-deoxyuridine 质量规格:美国进口原装,97% 人补体因子I(CFI)试剂盒 Human CFI ELISA Kit
高效cDNA第一链合成试剂盒血液过氧化氢(HYDROGEN PEROXIDE)活性
组织过氧化氢(HYDROGEN PEROXIDE)活性
化学发光法定量检测试剂盒
细胞过氧化氢(HYDROGEN PEROXIDE)活性
植物过氧化氢(HYDROGEN PEROXIDE)活性比色法定量检测试剂盒