高效cDNA第一链合成试剂盒
高效cDNA第一链合成试剂盒
高效cDNA第一链合成试剂盒
高效cDNA第一链合成试剂盒

100次高效cDNA第一链合成试剂盒

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2022-04-22 14:54:20
296
属性:
供货周期:现货;货号:GOY-F10306;应用领域:化工;主要用途:仅供科研使用;
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产品属性
供货周期
现货
货号
GOY-F10306
应用领域
化工
主要用途
仅供科研使用
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上海谷研实业有限公司

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产品简介

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详细介绍

下列是产品的订购信息!产品仅用于科研

中文名称

英文名称

产品规格

货号

高效cDNA第一链合成试剂盒

MMLV cDNA   Synthesis Kit

100

GOY-F10306

产品详细介绍:

本试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。本产品包含从RNA模板逆转录成cDNA第一链所需的所有试剂,其中包括MMLV逆转录酶、反应缓冲液、引物、dNTP等。经过突变改造的MMLV逆转录酶RNase H活性缺失,减少了逆转录反应中RNA的降解,更容易获得全长的cDNAMMLV逆转录酶热稳定性强,可得高产量的cDNA,使用简单方便。本系统对后续的PCR以及定量PCR试验兼容性高,适用各种PCR反应的DNA聚合酶。

产品特点:

RNase H-:经突变的MMLV逆转录酶,RNase H活性缺失,更易获得全长cDNA

使用方便:试剂盒包含除RNA模板外的逆转录所需全部试剂。

保存:-20

DNA提取流程图:

实验步骤
(1)
实验开始前将RNA提取液于65水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL80ul,50mL中加入300ul)
(2)
取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65
水浴3-10 min,期间混匀2-3
(4)
加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(5)
取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(6)
加入1/4V体积10M LiCl溶液,4放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4
离心20min
(8)
弃上清,500ul SSTE溶解沉淀
(9)
::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1(10,000rpm,4,5min)
(10)
2V体积的无水乙,-70冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4
离心20 min
(12)
弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)
200ulDEPC处理水溶解
(14)
用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(
在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1.
匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅
b.
单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(3.5cm直径的培养板)1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNADNA污染。
c
.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2
.将匀浆样品在室温(15-30)放置5分钟,使核酸蛋白复合物*分离。
3
.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-810000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5.
每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8
10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅
7.
把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙,室温放置10分钟。
8. 2-8
10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
快速真菌   50T  3-O-Methyl-Estrone  中文名:3-氧甲基基雌酮  分子式:C19H24O2  度:98.0%

快速HE组织细胞及脱落细胞染液   Phosphate buffer                 3-Amino-3-phenyl-1-propanol  中文名:3-氨基-3--1-  分子式:C9H13NO 

跨膜蛋白100   英文名称:   Human ansmembrane protein 100   规格:   48T/96T   英文缩写:   TMEM100  Ritonavir  中文名:  分子式:C37H48N6O5S2 

口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T  Phenformin   中文名:盐酸苯乙双胍  分子式:C10H16ClN5 

口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸检测试剂盒(-PCR)   48T  Phenformin   834-28-6  中文名:盐酸苯乙双胍  分子式:C10H16ClN5  度:98.0%
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